人皮质醇(Cortisol)ELISA试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供体外研究使用!

预期应用

ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中皮质醇(Cortisol)含量。

实验原理

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗Cortisol抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗Cortisol抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Cortisol呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制

1.        酶联板：一块（96孔）

2.        标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为20 ng/ml，做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)后，分别稀释成20 ng/ml，10 ng/ml，5 ng/ml，2.5 ng/ml，1.25 ng/ml，0.625 ng/ml，0.312 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。如配制10 ng/ml标准品：取0.5ml (不要少于0.5ml ) 20 ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3.        样品稀释液：1×20ml。

4.        检测稀释液A：1×10ml。

5.        检测稀释液B：1×10ml。

6.        检测溶液A：1×120μl（1:100）临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100μl/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

7.        检测溶液B：1×120μl/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。

8.        底物溶液：1×10ml/瓶。

9.        浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10.    终止液：1×10ml/瓶（2N H₂SO4）。

11.    覆膜：5张

12.    使用说明书：1份

自备物品

1.   酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热）

2.   微量加液器及吸头，EP管

3.   蒸馏水或去离子水，全新滤纸

标本的采集及保存

1.        血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.        血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.        细胞培养物上清或其它生物标本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：以上标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2个月；标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

样本处理：血清或血浆标本推荐稀释20倍，如：稀释20倍，取50uL