人环磷酸鸟苷(cGMP)ELISA试剂盒
本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!
预期应用
ELISA法定量测定人组织匀浆或其它相关生物液体中cGMP含量。
实验原理
用纯化的cGMP抗体包被微孔板,制成固相载体,往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的cGMP抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物(TMB)显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的cGMP呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(
试剂盒组成及试剂配制
1、 酶标板:一块(96孔)
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
6、 检测溶液A:1×120
7、 检测溶液B:1×120
8、 底物溶液:1×10ml/瓶。
9、 浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液:1×10ml/瓶(2 mol/L H2SO4)。
11、覆膜:5张
12、使用说明书:1份
自备物品
1、 酶标仪(建议仪器使用前提前预热)
2、 微量加液器及吸头,EP管
3、 蒸馏水或去离子水,滤纸
标本的采集及保存
1、 组织匀浆:将动物的组织标本先用PBS洗涤,去除多余血液,匀浆化后放在5~10 ml PBS中于
2、 其它生物标本:请
操作步骤
实验开始前,各试剂均应平衡至室温,试剂不能直接在37
1、 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 100
性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2、 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100
3、 弃去孔内液体,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分钟,大约400
4、 每孔加检测溶液B工作液(临用前配制)100
5、 弃去孔内液体,甩干,洗板5次,方法同步骤3。
6、 每孔加底物溶液90
7、 每孔加终止溶液50
8、 立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度(
1、 试剂准备:所有试剂在使用前应平衡至室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
2、 加样:加样或加试剂时,第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的 “预温育”时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)最好控制在10分钟内。推荐设置复孔进行实验。
3、 温育:为防止样品蒸发,实验时将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的温育时间和温度。
4、 洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响最后的酶标仪读数。
5、 试剂配制:Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配制使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请精确配制标准品及工作液,尽量不要微量配制(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10
6、 反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7、 底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。
洗板方法
1、 手工洗板方法:将推荐的洗涤缓冲液至少0.4ml注入孔内,浸泡1-2分钟,吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体,在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;根据需要,重复此过程数次。
2、 自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
特异性
本试剂盒可同时检测重组或天然的人cGMP,且与其它相关蛋白无交叉反应。
计算
各标准品及样本
检测范围:0.312 ng/ml - 20 ng/ml,绘制标准曲线请取用以下浓度值:20 ng/ml,10 ng/ml,5 ng/ml,2.5 ng/ml,1.25 ng/ml,0.625 ng/ml,0.312 ng/ml。
最低检测限:0.078 ng/ml
1、 由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析,
本产品可能存在一定的质量技术风险。
2、 最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关,请务必
准备充足的标本备份。
3、 在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和微生物的 污染,因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。
4、 试剂盒保存:请收到试剂盒后尽快将标准品、检测溶液A和检测溶液B保存于-20
5、 浓洗涤液会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
6、 刚开启的酶联板孔中可能会有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
7、 有效期:6个月。
8、 本操作说明适用于48T试剂盒,但48T试剂盒所有试剂减半。
厦门慧嘉生物科技有限公司专业代理众多国际生命科学领域的知名品牌。致力于各种ELISA试剂盒、免疫组化试剂盒、一抗二抗、细胞因子、生物试剂、移液器、耗材的销售推广及服务工作。
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人环磷酸鸟苷(cGMP)ELISA试剂盒
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