单纯疱疹Ⅱ型抗体IgG(HSVⅡAb-IgG)检测
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[测定方法] ELISA法
[方法学原理] 在微孔表面包被纯化的HSV抗原。被稀释过的患者血清加入微孔中。如存在HSV-ⅡAb—IgG可与微孔上抗原相结合。然后洗去未结合物质,再加入酶联液,与抗原抗体复合物结合。洗去过量的酶联液。最后加入底物和色原(显色液)。在特定时间终止酶联液的催化反应。所产生的颜色强度与标本中HSV—ⅡAb-IgG含量呈正相关。通过酶标仪与校正和对照相比,读出结果。
[标本准备] 静脉抽血2ml,不抗凝。
[试剂]
1.微孔板
2.样品稀释液
3.HRP-抗人IgG酶结合物
4.阴性对照
5.阳性对照
6.洗涤剂
7.TMB显色液
8.终止液
[仪器设备] 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。
[测定步骤]
1.吸取5ul血清标本加入250ul标本稀释液中,做1:51稀释。
2.吸取100ul稀释过的血清、阳性对照、阴性对照和校正液(不稀释),加入微孔板内,设空白对照1孔。振荡混匀,去除孔内液体中气泡,室温环境中孵育20min。
3.弃去孔内液体,用洗涤液洗5次。
4.每孔再加入100ul酶联结合物,室温环境中孵育20rain。
5.弃去孔中酶联液,用洗涤液洗5次。
6.每孔加入100ul TMB显色液,室温环境中孵育10min。
7.每孔加人100rd终止液,终止反应,充分混匀。
8.用酶标仪(波长为450nm)读取吸光度。以待测样本吸光度大于校正液孔吸光度为阳性。
[注意事项]
1.整个检测过程应符合实验室质量手册和生物安全守则规定,严防交叉污染。
2.所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。
3.试剂应保存于2~
4.洗涤时各孔均应加满洗涤液,防止孔内有游离酶未洗净,每次洗板后均应在吸水纸上拍干。
5.血标本应分离出血清保存,2~
6.试剂在储存或使用过程中,禁止过热、曝晒或强光。
[正常参考值] HSV—ⅡAb-IgG阴性
[临床意义] HSV先天性感染主要是通过胎盘引起宫内感染,诱发早产、死胎、胎儿畸形及脑、眼等多器官损害。HSV也可通过呼吸道或产道造成新生儿感染,可呈无症状隐性感染,也可引起不同形式或不同程度的临床表现,轻者仅为口腔、皮肤、眼部疱疹,重者则呈中枢神经系统感染甚至全身性播散性感染。
HSVAb-IgM阳性提示为患者感染早期或原发性感染。但IgM抗体因在检测过程中易受各种因素的影响,出现假阴性结果,因此HSVAb—IgM阴性结果不能完全排除HSV感染。HSVAb—IgG阳性,说明曾经感染这种病原体,具有一定免疫力。连续监测IgG抗体水平,若IgG迅速升高到4倍以上的较高水平时,患者可能为HSV再次感染。
在HSV的两个亚型中,HSV-I型主要通过呼吸道或与患者病损部位直接接触而传播,引起呼吸系统、皮肤黏膜病变,妊娠妇女感染该病毒可引起宫内感染;HSV-Ⅱ型主要通过接吻和性交传播,引起性器官病变和新生儿感染。
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