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(2)简易过1碘酸钠法%E0Ov:s2T本法是以NaIO4先将HRP表面的糖分子氧化成醛基,然后再与Ig上的氨基相结合,所获酶标记抗1体的产率高,将近70%的HRP和Ig结合,99%的Ig与酶结合,酶与Ig的活性无重大损失,是目前最1常用的方法。7p3C#@,w9L5i%F%@7r9Z1)原理:;hd)XEu_amp;O5y经典的过1碘酸钠法中需采用二1硝基氟本封闭HRP上残留的α-和ε氨基基以避免酶分子之间的交联。后来Wilson等改用在低PH下使NaIO4氧化HRP,从而省去了二1硝基氟本封闭HRP步骤。HRP经NaIO4氧化后形成的醛化酶可与抗1体分子的氨基相连,形成斯夫氏硷,后者可进一步用NaBH4(或乙醇1胺)还原生成稳定的酶标记抗1体。间接法是检测抗1体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗1体(抗人免疫球蛋白抗1体)以检测与固相抗原结合的受检抗1体,故称为间接法(见图2-3)。操作步骤如下:1)将特异性抗原与固相载体联结,形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。2)加稀释的受检血1清,保温反应。血1清中的特异抗1体与固相抗原结合,形成固相抗原抗1体复合物。经洗涤后,固相载体上只留下特异性抗1体,血1清中的其他成份在洗涤过程中被洗去。3)加酶标抗抗1体。可用酶标抗人Ig以检测总抗1体,但一般多用酶标抗人IgG检测IgG抗1体。固相免疫复合物中的抗1体与酶标抗1体抗1体结合,从而间接地1标记上酶。洗涤后,固相载体上的酶量与标本中受检抗1体的量正相关。2.标准曲线线性不佳,或是平行性不好。a.原因:温育位置避光不好或受到气流干扰。解决办法:请确认温育位置既不透光也不透风(如抽屉内)。b.原因:操作时间拖太久。解决办法:请在方法熟练后再进行操作。c.原因:微孔间相互污染。解决办法:加样品时,请小心勿溅出微孔外,以免造成其它微孔的污染。d.原因:标准品或酶标记物所加入的量不一致。解决办法:请使用已校正过的移液枪,并确保其与吸头之间有高度密合性。e.原因:添加样品或试剂的操作方法不正确。解决办法:加样品或试剂时,吸头请勿接触微孔。f.原因:洗板过程发生问题(如管路堵塞、洗完板后未立刻进行下一步骤)。解决办法:请随时监控洗板1机洗板过程,洗完后立即进行下一步骤。3.吸光值均偏高(或线性不够陡)。a.原因:室温太高(gt;25℃)。解决办法:若无法降低室内温度,请适当缩短步骤4的温育时间。b.原因:底物溶液受到污染。解决办法:若发现底物溶液已呈现淡蓝色,请不要再使用。c.原因:反应时间超过太久。解决办法:请控制反应时间。d.原因:酶标记物污染了盒内其它试剂。解决办法:使用过的吸头应立即丢弃,可避免试剂间相互污染,凡是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡,人elisa试剂盒价格,再以清水冲洗干净,可确保无残留)4.阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。a.原因:微孔中的试剂未能充分混合。解决办法:试剂加完后,需轻敲盘四周使其充分混合均匀。b.原因:洗板过程发生问题(同2-f.)。解决办法:请参考2-f.c.原因:添加样品或酶标记物的量不一致。解决办法:请参考2-d.人elisa试剂盒价格-默沙克(推荐商家)由武汉默沙克生物科技有限公司提供。武汉默沙克生物科技有限公司()坚持“以人为本”的企业理念,拥有一支敬业的员工队伍,力求提供好的产品和服务回馈社会,并欢迎广大新老客户光临惠顾,真诚合作、共创美好未来。默沙克——您可信赖的朋友,公司地址:武汉市东湖新技术开发区南湖南路8号,联系人:吴经理。)
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