武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、***学***盒、生化***、ELISA***盒、分子生物学***等多用途多属种的高品质产品，服务涉及分子生物学、细胞生物学、***学等生命科学领域。1、染色过强原因解决办法抗1体的浓度过高或抗1体孵育时间过长降低抗1体滴度（一般指浓缩性抗1体）抗1体孵育时间：室温1小时或4℃过夜孵育温度过高，孵育温度超过37℃一般室温20-28℃DAB显色时间过长或DAB浓度过高显色时间不能超过5-10分钟，以显微镜下观察为准2、非特异性背景染色原因解决办法操作过程中冲洗不充分每步冲洗3×5***中含过氧化物酶未阻断可再配置新鲜3%H2O2封闭，孵育时间延长***中含内源性生物素正常非***动物血1清再封闭血1清蛋白封闭不充分延长血1清蛋白封闭时间3、细胞培养上清取细胞培养上清到离心管，1000×g离心20min，除去细胞碎片及杂质，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。4、细胞裂解液1）吸去培养板内的培养基，用胰酶消化细胞，加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。2）收集细胞悬液，1000×g离心10min，弃去培养基，用预冷的PBS润洗3次。3）加入适量的预冷PBS或细胞裂解液（临用前加入蛋白酶抑1制剂）重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μLPBS重悬。假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇，例如HBsAg的a决定簇，也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。展片、贴片打开水浴锅，使水温维持在40-45℃，另准备30%乙醇溶液。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型，虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性，这也是用单抗作夹心法应注意的问题。双抗1体夹心法测抗原的另一注意点是类风1湿因子（RF）的干扰。在标记***测定中，一般加入过量的标记***以保证与待测物彻底反应。RF是一种自身抗1体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗1体夹心法检测的血1清标本中如含有RF，它可充当抗原成份，同时与固相抗1体和酶标抗1体结合，表现出假阳性反应。采用F（ab）或Fab片段作酶结合物的***，由于去除了Fc段，从而消除RF的干扰。双抗1体夹心法ELISA***是否受RF的影响，已被列为这类***的一项考核指标（参见6.2）。双抗1体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。)