平衡柱子即用洗脱剂中极性小的溶剂（例如、、等）用计量泵（或氮气）打入（压入）层析柱上端。此溶剂因极性小于硅胶，不会把吸附在硅胶上端面的物料中有用物质洗脱下来，而只能将物料中的极性很小的油脂等杂质洗下。另外，此过程还可以将柱中硅胶中的大量空气往下赶出柱外。这个过程俗称“平衡”柱子或“平衡”吸附剂。可使硅胶被溶剂浸润，且排出空气，有利于续后的洗脱分离过程。当平衡用的溶剂从柱下流出后，可以停止此过程，改用洗脱剂洗脱分离过程；平衡过程也可以再理行一段时间，将柱子中的空气多排出一些，但溶剂耗量也会增加。层析柱的操作方法以中压柱层析法提取分离冬凌草甲素为例：1.吸附剂的处理及柱子装填将一定量薄层层析硅胶装入搪瓷盘置于烘箱中，于105。C活化2H后，取出放置室温即可装柱。柱子采用干法填充，填满整个柱体，不留死体积，密封后用柱塞式计量溶剂泵按一(5：95)比例泵入溶剂，至溶剂流出止。2.上样将冬凌草的乙醇提取物400G用适量溶解，泵入中压柱柱头，然后泵入1000RID。3.洗脱以一定比例的一为洗脱液，层析柱生产厂家，60ML/MIN的流速进行梯度洗脱，柱的使用压力为2～3KG/C。按每份500ML收集，TLC检识展开剂一(2：8)，显色剂5%香草醛乙醇液至洗脱完全，相同流份合并，回收溶剂。将冬凌草甲素流份合并蒸干。加入适量热溶后自然放置，析出结晶，为冬凌草甲素。4.层析柱再生、平衡有效成分经TLC检识全部流出后，用纯5000ML再生，一(5：95)平衡后，可再次上样，反复使用(使用次数随原料不同而异，一般可连续使用2—6个月以上)。5.重结晶冬凌草甲素结晶析出完全后，减压过滤，然后用少量洗涤(洗涤液保留，作下次热溶冬凌草甲素用)。将冬凌草甲素再用适量热溶后放置，结晶再次析出，待结晶完全后，抽滤，用少量洗涤，将结晶室温下晾干后置真空干燥箱中，35度真空干燥至恒重。密封于瓶中，置干燥器中保存。6.薄层层析分析取适量冬凌草甲素对照品及由上述方法得到的冬凌草甲素样品溶解后点于同一硅胶G薄层板上，以一(8：2)为展开剂进行展开，5%香草醛乙醇液显色，于105。C烘至斑点清晰。表明在该展开系统下，冬凌草甲素样品和对照品都具有相同的RF值，并呈现出同样的蓝绿点，在制备的冬凌草甲素样品中，层析柱，没有杂质斑痕。层析柱装柱步骤流程1.HETP计算所用样品为1.0%N***或纯溶液，层析柱供应，上样大约为总柱床体积的1%。对于34和50μm的填料，使用的线性流速应为30cm/h，90μm的填料选择20cm/h的线性流速。通过下式计算HETP:HETP=L/N其中L为柱床高度（cm），N为理论塔板数，N=5.54(Ve/Wh)2；Ve为洗脱体积（mL），层析柱生产商，Wh峰高一半处的峰宽（mL）。2.峰对称因子计算洗脱峰的峰形应尽可能对称，即对称因子尽可能接近1。As按下列公式计算：As=b/a其中，a为峰高10%处的前半个峰宽，b为峰高10%处后半个峰宽。层析柱供应-天津龙鼎世纪-层析柱由天津龙鼎世纪轻工设备有限公司提供。天津龙鼎世纪轻工设备有限公司坚持“以人为本”的企业理念，拥有一支高素质的员工***，力求提供更好的产品和服务回馈社会，并欢迎广大新老客户光临惠顾，真诚合作、共创美好未来。龙鼎世纪——您可信赖的朋友，公司地址：天津市静海开发区津德路东侧，联系人：王经理。)