【摘要】目的建立一种快速制备甲胎蛋白单克0隆抗0体(AFP—McAb)杂交瘤细胞系的方法。方法以常规和改良两种方式同时免0疫8～12周Balb／c小鼠，取小鼠脾细胞与骨0髓瘤细胞SP2／0融合并行次黄piao呤、氨基蝶呤与胸苷选择性培养。用间接酶链免0疫吸附试验法(EI。ISA)筛选阳性克0隆株，并建立细胞系。结果在较短时间内，改良法能获得高0效价的免0疫抗0体，与常规免0疫法相比有极显著差异(P<0．001)，同时改良法的细胞融合率和抗0体阳性率也显著高于常规免0疫法(P<o．001)。筛选获得的高0效分泌抗人AFP—McAb的阳性杂交瘤细胞珠进行了初步鉴定。结论新的改良方法优化了常规的McAb制备中动物免0疫程序，并能成功筛选出AFP—McAb杂交瘤细胞系。抗原制备及纯化抗原制备:参照文献［10］制备MRJ抗原。复苏pET28a-mrj转Rosetta菌0种接种于具Kana抗性的10mL液体培养基中的，37℃培养过夜，次日以1∶50转瓶进行扩大培养，当菌液OD600达0．6时加入浓度为5mmol/L的IPTG，37℃诱导8h超声碎裂后进行考马斯亮蓝染色检验，有目的蛋白的大量表达。抗原大量制备及纯化:以5×10-4mol/L浓度的IPTG，37℃条件下大量诱导(200mL菌液)8h后收集样品，超声裂解后将所得MRJ蛋白过Ni-IDA凝胶柱亲和纯化，考马斯亮蓝染色后检测目的蛋白纯度高于90%，可用于单克0隆抗0体制备动物免0疫的抗原。了解产品参数及价格，请百度搜索“博奥龙”，进入博奥龙官0网，搜产品名称即可报价信息。欢迎在咨询~博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗，涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、AlexaFluor、Cy3、Cy5、AMCA、TRITC、TexaRed等标记二抗；品类齐全的内参标签抗0体；另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。甲胎蛋白(AFP)是一种胎儿特异性糖蛋白，分子量约70，000～72，000道尔顿^，新型佐剂研究方向，在胚胎肝0脏和卵黄囊中合成，正常人血中含量甚微。1972年有人首0次报道开放性神0经管畸形胎儿、羊水中有高水平的AFP。若胎儿羊水中AFI’值高于均值常见于患无脑儿或脊柱裂的胎儿，亦见于其他多种畸形，如先天0性shen病、食道或肠闭锁、囊0性水瘤、骶尾部畸胎瘤、Rh血型不和、先天愚型、先0天性性腺发育不全等∽J。1983年发现母体血0清AFP水平的降低与唐氏***有密切关系一。。因此制备高0效特异的AFP单克抗0体(McAb)具有重要的意义。新型佐剂研究方向-博特龙(在线咨询)由苏州博特龙***技术有限公司提供。苏州博特龙***技术有限公司坚持“以人为本”的企业理念，拥有一支高素质的员工***，力求提供更好的产品和服务回馈社会，并欢迎广大新老客户光临惠顾，真诚合作、共创美好未来。博特龙——您可信赖的朋友，公司地址：江苏省苏州市相城开发区观塘路1号西交大漕湖科技园C幢810，联系人：刘总。)