【摘要】目的建立一种快速制备甲胎蛋白单克0隆抗0体(AFP—McAb)杂交瘤细胞系的方法。方法以常规和改良两种方式同时免0疫8～12周Balb／c小鼠，取小鼠脾细胞与骨0髓瘤细胞SP2／0融合并行次黄piao呤、氨基蝶呤与胸苷选择性培养。用间接酶链免0疫吸附试验法(EI。ISA)筛选阳性克0隆株，并建立细胞系。结果在较短时间内，改良法能获得高0效价的免0疫抗0体，与常规免0疫法相比有极显著差异(P<0．001)，同时改良法的细胞融合率和抗0体阳性率也显著高于常规免0疫法(P<o．001)。筛选获得的高0效分泌抗人AFP—McAb的阳性杂交瘤细胞珠进行了初步鉴定。结论新的改良方法优化了常规的McAb制备中动物免0疫程序，并能成功筛选出AFP—McAb杂交瘤细胞系。动物免0疫使用quickantibody作为免0疫佐剂，对小鼠腿部肌肉***免0疫，细胞佐剂，MRJ重组蛋白(1μg/mL)与免0疫佐剂各200μL混匀免0疫6-8周龄BALB/c小鼠4只，每只***100μL。初次免0疫后第21天同样的方法进行第二次免0疫，第35天尾静脉取少量血做效价检测，间接ELISA检测效价滴度高于1∶8000则进行冲击免0疫，冲击免0疫直接以不加佐剂的MRJ蛋白对小鼠冲击免0疫一次，每只20μg。冲击免0疫后96h内取脾0脏细胞做细胞融合。由于改良免0疫法只需二次基础免0疫而常规免0疫法则需要2倍于改良法的免0疫次数，所以改良法抗原用量明显少于常规法，从而大大减少了实验成本的消耗。此外，本实验通过对比两种免0疫方法的细胞融合率及抗0体阳性率，发现改良免0疫法均显著高于常规免0疫法。经过后续实验，证明改良法免0疫小鼠的杂交瘤细胞经二次克0隆化后，抗0体阳性率可达检测孔的90％以上。杂交瘤细胞体外连续传代培养，并冻存复苏后仍具有分泌AFP—McAb的能力，并经染色体计数结果表明已成功获得一株AFP—McAb细胞株。这表明改良法与常规方法具有同样的有效性和稳定性。细胞佐剂-苏州博特龙公司(在线咨询)由苏州博特龙***技术有限公司提供。苏州博特龙***技术有限公司是一家从事“二抗,HRP,Biotin,FITC,AU,PE”的公司。自成立以来，我们坚持以“诚信为本，稳健经营”的方针，勇于参与市场的良性竞争，使“博奥龙/BiodragonAbBox”品牌拥有良好口碑。我们坚持“服务至上，用户至上”的原则，使博特龙在生物制品中赢得了客户的信任，树立了良好的企业形象。特别说明：本信息的图片和资料仅供参考，欢迎联系我们索取准确的资料，谢谢！)