抗果蝇MRJ蛋白单克0隆抗0体的制备和鉴定摘要:制备抗果蝇MRJ蛋白单克0隆抗0体可用于研究果蝇mrj的生物学功能，使用IPTG诱导重组质粒pET28a-mrj在大肠杆0菌Rosetta中表达，重组蛋白经过Ni-IDA凝胶柱亲和纯化后免0疫BALB/c小鼠。然后取免0疫好的小鼠的脾0脏细胞与小鼠骨0髓瘤细胞SP2/0融合，经克0隆和筛选获得了能分泌抗果蝇MRJ蛋白单克0隆抗0体的杂交瘤细胞株。腹0水制备后获得单克0隆抗0体，通过ELISA和WesternBlot对所获得的抗0体进行鉴定，结果表明所制备单克0隆抗0体能够特异性结合于原核及真核细胞表达的MRJ蛋白，pei转染***，可用于研究mrj***的生物学功能。关键词:mrj;细胞融合;单克0隆抗0体抗原制备及纯化抗原制备:参照文献［10］制备MRJ抗原。复苏pET28a-mrj转Rosetta菌0种接种于具Kana抗性的10mL液体培养基中的，37℃培养过夜，次日以1∶50转瓶进行扩大培养，当菌液OD600达0．6时加入浓度为5mmol/L的IPTG，37℃诱导8h超声碎裂后进行考马斯亮蓝染色检验，有目的蛋白的大量表达。抗原大量制备及纯化:以5×10-4mol/L浓度的IPTG，37℃条件下大量诱导(200mL菌液)8h后收集样品，超声裂解后将所得MRJ蛋白过Ni-IDA凝胶柱亲和纯化，考马斯亮蓝染色后检测目的蛋白纯度高于90%，可用于单克0隆抗0体制备动物免0疫的抗原。杂交瘤分泌McAb的稳定性杂交瘤细胞体外连续传代培养了3个月，培养上清经ELISA检测能持续分泌抗AFP—McAb，杂交细胞经液氮冻存一年后细胞复苏培***长良好，仍能保持分泌抗AFP—McAb的能力。杂交瘤细胞染色体计数杂交瘤细胞染色体总数为96～104条，SP2／0骨0髓瘤细胞染色体总数为65条，Balb／c小鼠脾细胞染色体总数为40条，符合杂交瘤特征。pei转染***-博特龙(在线咨询)由苏州博特龙***技术有限公司提供。苏州博特龙***技术有限公司为客户提供“二抗,HRP,Biotin,FITC,AU,PE”等业务，公司拥有“博奥龙/BiodragonAbBox”等品牌，专注于生物制品等行业。，在江苏省苏州市相城开发区观塘路1号西交大漕湖科技园C幢810的名声不错。欢迎来电垂询，联系人：刘总。)