***与仪器试剂:pET28a-mrj转Rosetta菌0种由本实验室所保存。免0疫佐剂quickantibody购自北京康碧泉公司;HAT选择性培养基、HT培养基、8-Azaguanine和融合***50%PEG购自美国Sigma公司;胎牛血0清及PRMI1640培养基为Hyclone产品;辣根过氧化物酶(HRP)标记山羊抗小鼠IgG;8周龄雌性健康BALB/c小鼠，本实验室饲养;小鼠骨0髓瘤细胞SP2/0由南京大学赠送，融合前两星期复苏并经8-Azaguanine筛选;其他***均为国产分析分析纯。仪器:二氧化碳培养箱(Thermo);倒置显微镜(Olympus);细胞培养耗材，96孔板、24孔板、6孔细胞培养板、移液***(Corning);1mL的A蛋白层析柱QuickAntibody-Mouse5W（5周标准鼠单抗/多抗制备佐剂）QuickAntibody-Mouse5W用途通过5周2针的标准免0疫程序制备小鼠单克0隆和多克0隆抗0体，fu水制备，ELISA滴度（Cutoff值为0.1000）可达到1:10000-1:10000000。QuickAntibody-Mouse5W使用方法（详见使用说明书）1.用生理盐水将抗原稀释到2倍***终浓度（按每针次50μl用量配制）。备注：推荐使用的抗原用量为（1）免0疫原性较强的灭活全病毒或全***以及病毒样颗粒抗原每针次1-5μg；（2）免0疫原性较弱的亚单位蛋白抗原每针次5-20μg；（3）偶联了载体蛋白的小分子抗原每针次20-50μg。2.充分混匀佐剂，无菌条件下取出所需用量（按每针次50μl）与抗原按体积比1:1迅速混匀。备注：本佐剂产生沉淀属正常现象，与抗原混合操作越快越好。由于改良免0疫法只需二次基础免0疫而常规免0疫法则需要2倍于改良法的免0疫次数，所以改良法抗原用量明显少于常规法，从而大大减少了实验成本的消耗。此外，本实验通过对比两种免0疫方法的细胞融合率及抗0体阳性率，发现改良免0疫法均显著高于常规免0疫法。经过后续实验，证明改良法免0疫小鼠的杂交瘤细胞经二次克0隆化后，抗0体阳性率可达检测孔的90％以上。杂交瘤细胞体外连续传代培养，并冻存复苏后仍具有分泌AFP—McAb的能力，并经染色体计数结果表明已成功获得一株AFP—McAb细胞株。这表明改良法与常规方法具有同样的有效性和稳定性。fu水制备-苏州博特龙(图)由苏州博特龙***技术有限公司提供。苏州博特龙***技术有限公司位于江苏省苏州市相城开发区观塘路1号西交大漕湖科技园C幢810。在市场经济的浪潮中拼博和发展，目前博特龙在生物制品中享有良好的声誉。博特龙取得全网商盟认证，标志着我们的服务和管理水平达到了一个新的高度。博特龙全体员工愿与各界有识之士共同发展，共创美好未来。)