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动物免0疫使用quickantibody作为免0疫佐剂,对小鼠腿部肌肉免0疫,MRJ重组蛋白(1μg/mL)与免0疫佐剂各200μL混匀免0疫6-8周龄BALB/c小鼠4只,每只100μL。初次免0疫后第21天同样的方法进行第二次免0疫,氢氧化铝佐剂,第35天尾静脉取少量血做效价检测,间接ELISA检测效价滴度高于1∶8000则进行冲击免0疫,冲击免0疫直接以不加佐剂的MRJ蛋白对小鼠冲击免0疫一次,每只20μg。冲击免0疫后96h内取脾0脏细胞做细胞融合。抗果蝇MRJ蛋白单克0隆抗0体的制备和鉴定摘要:制备抗果蝇MRJ蛋白单克0隆抗0体可用于研究果蝇mrj的生物学功能,使用IPTG诱导重组质粒pET28a-mrj在大肠杆0菌Rosetta中表达,重组蛋白经过Ni-IDA凝胶柱亲和纯化后免0疫BALB/c小鼠。然后取免0疫好的小鼠的脾0脏细胞与小鼠骨0髓瘤细胞SP2/0融合,经克0隆和筛选获得了能分泌抗果蝇MRJ蛋白单克0隆抗0体的杂交瘤细胞株。腹0水制备后获得单克0隆抗0体,通过ELISA和WesternBlot对所获得的抗0体进行鉴定,结果表明所制备单克0隆抗0体能够特异性结合于原核及真核细胞表达的MRJ蛋白,可用于研究mrj***的生物学功能。关键词:mrj;细胞融合;单克0隆抗0体使用方法1.用生理盐水将抗原稀释到2倍***终浓度(按每针次50μl用量配制)。备注:推荐使用的抗原用量为(1)免0疫原性较弱的合成肽每针次10-100μg;(2)亚单位蛋白抗原每针次1-10μg;(3)免0疫原性较强的灭活病原微生物和病毒样颗粒抗原每针次1-10μg;(4)肿0瘤细胞裂解物每针次10-100μg。2.37oC水浴中解冻佐剂,充分混匀,无菌条件下取出所需用量(按每针次50μl)与抗原按体积比1:1混匀。3.通过后腿小腿肌肉或腹0股0沟皮下0免0疫小鼠,每只小鼠100μl。4.第7天按同样方式加强免0疫1针。备注:每次免0疫佐剂和抗原现配现用5.第014天通过ELISPOT、胞内细胞0因子染色、MHC四聚体染色或其他可行方法检测脾0脏或引流淋巴0结中的抗原特异性CD4+TH1和/或CD8+CTL反应。氢氧化铝佐剂-博特龙技术有限公司由苏州博特龙技术有限公司提供。苏州博特龙技术有限公司拥有很好的服务与产品,不断地受到新老用户及业内人士的肯定和信任。我们公司是商盟认证会员,点击页面的商盟***图标,可以直接与我们***人员对话,愿我们今后的合作愉快!)
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