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PCR实验室建立方法:
建立样品准备区这个区域专门用作样品的准备,在制备和操作用于核酸提取的***时应该采取预防措施:⑴PCR产物和带有要扩增序列的DNA粘贴不能在这个房间操作。⑵***培养物、***标本和xue清样品都带进样品准备间处理,以根据应用的需要提取DNA或RNA。⑶用于样品处理的工具不能被用作普通分子粘贴的工具,也不能用作操作靶序列。⑷DNA样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作,以防止在吸取样品时有气溶胶遗留。⑸大体积样品应该用单独包装的无菌一次性移液管吸取。⑹管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生,而且管子不能用力崩开,这样会产生气溶胶。⑺任何时候都应该穿实验服和带手套,手套要经常更换,尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。实验服要专门用于样品准备间,经常清洗。
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在前PCR区建立PCR混合物:
⑴可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃,在实验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。
⑵如果你的实验室使用多套引物,以致于配制包括所有***的单一反应混合物不够经济,可以考虑分装保存够一天的PCR成分。
⑶作为一个规则,应该保存一套阴性、弱阳性和强阳性对照样品来分析样品配制和PCR前过程的效率和洁净程度。而且,你也希望通过使用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里面不含扩增***物。
⑷阴性样品要与每组样品同时做,以分析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在PCR产物的污染,阴性对照应该包括核酸以外的所有***。
⑸当做阳性对照时,有两个理由决定了应该使用很少数量的核酸。
⑹由于必须有对照反应,对照模板的特点应该予以考虑。
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PCR实验室平面布局(一级屏障)
整个平面布局完全能够满足***标准及标准和实验场所要求,而且充分利用了实验场所划分的建筑空间,按照实验室操作程序的要求配备了各种功能的房间,操作路线方便快捷,每间实验室的平面尺寸都是按照各种实验功能分配的。
设计上将实验室主体框架为彩钢板玻璃隔断,颜色为哑白色,彩钢厚度每面0.426mm,彩钢岩棉夹芯板防火等级为不燃烧;聚苯yu烯彩钢夹芯板防火等级为阻止燃烧。隔断玻璃厚度为5mm;为防止沉积灰尘窗料使用R25mm铝合金圆弧压线;所有二维连接处的内侧均使用R50mm铝合金内圆角,暴露在外的二维连接线的外侧则用R100mm铝合金外圆角连接;彩钢板的三维连接处使用三维接点过渡,而彩钢板与墙面地面则用铝合金槽铝联接。吊顶材料亦为彩钢板。
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PCR实验室完备的实验室配套设施
完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件,应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器,如超净工作台、离心机、加样器等。
PCR扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域:***贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。为避免交叉污染,进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行,即只能从***贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。
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