目前，大肠菌群检测方法发展很快，已提高到分子生物学水平，使检测更快速、准确。酶底物法以其操作简便、检测周期短，将取代多管发酵法、滤膜法等传统方法，尤其是酶底物法采用密封培养技术，在检测***污水时可以减少人员接触而降低检测人员的致病风险，因此具有更强的实用价值和应用价值，正是目前水中粪大肠菌群的快速检测标准方法之一。

酶底物法测定总大肠菌群的影响因素

培养温度

总大肠菌群和大肠埃希氏菌的检测培养温度需严格控制在35～37℃，培养温度过高或过低均使检测结果不准确。

培养时间

总大肠菌群培养16～20 h 的检测结果与24 h相比均有显著性差异( p＜0.05)，培养22、28 与 24 h 结果差异不显著( p＞0.05)；而大肠埃希氏菌培养 16 ～22 h 的检测结果与 24 h 相比均有显著性差异( p＜0.05)，培养28 h与24 h结果无显著性差异( p＞0.05)。此方法对总大肠菌群的检测培养时间在 22～28h之间可以得到准确结果，而大肠埃希氏菌的检测则需24～28h；无论振荡培养或者静置培养对培养结果基本没有影响。

酶底物（英语：substrate）在生***学领域指参与生化反应的物质，可为化学元素、分子或化合物，经酶作用可形成产物，一个生化反应的底物往往同时也是另一个化学反应的产物。

酶底物法采用 ONPG 和 MUG 两种营养指示剂，这两种***分别可以被大肠菌群的 β-半乳糖苷酶和大肠***的 β-葡糖醛酸酶分解代谢。当大肠菌群在酶底物检测***中生长时，其使用 β-半乳糖苷酶分解代谢 ONPG，并使样品从无色变为***。大肠***使用 β-葡糖醛酸酶分解代谢 MUG 时，能够发出荧光。