水质大肠菌群酶底物法检测系统原理

一、检测用途：酶底物法测定用途：用于检测水中总大肠菌群粪大肠菌群（耐热大肠菌群）和大肠埃希氏菌。可用于检测水的类型：饮用水、水源水、废水、食品水、地表水、地下水、海水、瓶装水、中水、二次供水、管网水、畜牧用水、yi疗用水等。二、检测原理：酶底物法采用ONPG 和MUG 两种营养指示剂，这两种***分别可以被大肠菌群的 β-半乳糖苷酶和大肠***的 β-葡糖醛酸酶分解代谢。当大肠菌群在酶底物检测***中生长时，其使用 β-半乳糖苷酶分解代谢 ONPG，并使样品从无色变为***。大肠***使用 β-葡糖醛酸酶分解代谢MUG 时，能够发出荧光。

酶底物法测定总大肠菌群的影响因素

环境因素的影响

对同一水样在自然环境下与无菌室中分别进行总大肠菌群和大肠埃希氏菌检测， 培养时间为 24 h，培养温度为( 36 ± 1) ℃ ，水样在自然环境下与无菌室内总大肠菌群和大肠埃希氏菌的检测值相对偏差在 10% 以内，样品T检验分析p＞0．05，监测值差异不显著，表明此方法对实验环境是否无菌没有严格的要求。

酶底物（英语：substrate）在生***学领域指参与生化反应的物质，可为化学元素、分子或化合物，经酶作用可形成产物，一个生化反应的底物往往同时也是另一个化学反应的产物。

酶底物法采用 ONPG 和 MUG 两种营养指示剂，这两种***分别可以被大肠菌群的 β-半乳糖苷酶和大肠***的 β-葡糖醛酸酶分解代谢。当大肠菌群在酶底物检测***中生长时，其使用 β-半乳糖苷酶分解代谢 ONPG，并使样品从无色变为***。大肠***使用 β-葡糖醛酸酶分解代谢 MUG 时，能够发出荧光。

大肠***检测方法

生化鉴定

生化鉴定常用三糖铁琼脂（TSIA）和KIA/MIU(AA -/ -）和IMVC（ --）来初步鉴定。Z后鉴定依据全方面生化反应，典型的大肠埃希菌的基本生化反应特征：TSIA（双糖铁）产酸/产气，产气、CIT（枸橼酸盐）阴性、URE（脲酶）阴性、IDN阳性、MOT（动力） /-、ORN（鸟氨酸） /-。

分子生物学检测

致泻性大肠***是Z早应用分子诊断法的一类致病菌。事实上，分子生物学方法是粪便菌群中致泻性大肠***不同类型间相互间区分以及它们与非致病性大肠***之间相区分的Z普遍、可靠的技术。目前对致泻性大肠***的分子生物学检测研究，在核酸探针技术和PCR法两个方面已经获得了重大进展。