大肠菌群检验方法

***标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。　　乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。

　　分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。

　　证实试验：挑取平板上的ke疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。

　　报告：根据证实为大肠***阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。

固定底物技术酶底物法（Defined Substrate Technology）采用大肠菌群***能产生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）分解ONPG（Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside）使培养液呈***，以及大肠埃希氏菌产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG（4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide）使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光的原理，来判断水样中是否含有大肠菌群及大肠埃希氏菌。固定底物技术酶底物法可以选用国标中推荐粉状培养基（西安立科公司的酶底物***）来进行简便的操作；无需确认试验；固定底物技术酶底物法检测时间短，只需24小时即可同时定量出水样中大肠菌群和大肠埃希氏菌的MPN值。

在现在已知的大肠***检测方法中，酶底物法是目前水中大肠***检测的***方法。这也就直观的影响到了很多检测人员对于酶底物法检测水中大肠***的方法的掌握，因为如果使用传统的多管发酵法和滤膜法的话，整体的操作过程比较繁琐，并且是试验环境要求比较高。检测时间比较长，所以酶底物法是现在追捧的检测的水中大肠***的方法。

那其实从整个客观角度来说，相对于多管发酵和滤膜法，酶底物法检测步骤大大减少，而且对实验环境要求不高，检测时间可减少到24小时，在日常水样监测及应急监测中具有很好的应用前景，可及时检测，预防，较大限度的减少重大公共安全事故的发生几率。酶底物法有商品化***供应，实验操作简便，无需确认试验，可同时检测水样中大肠菌群和大肠埃希氏菌。