水中粪大肠菌群的常见检测方法

1、聚合酶链式技术

提取粪大肠菌群混悬液和待测水样的DNA，利用PCR技术扩增编码约260bp的LacZ***（β-半乳糖苷酶***）和约150BP的UdiA***（β-D-半乳糖苷酶***）的DNA，分别检测大肠菌群数和大肠***。

2、荧光原位杂交技术

由于粪大肠菌群特异的DNA序列，借助荧光标记的特异寡聚核苷酸片段作为的探针与待测水样中的DNA分子杂交，将杂交细胞经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量分析，确定菌群数。

目前，大肠菌群检测方法发展很快，已提高到分子生物学水平，使检测更快速、准确。酶底物法以其操作简便、检测周期短，将取代多管发酵法、滤膜法等传统方法，尤其是酶底物法采用密封培养技术，在检测***污水时可以减少人员接触而降低检测人员的致病风险，因此具有更强的实用价值和应用价值，正是目前水中粪大肠菌群的快速检测标准方法之一。

大肠***检测：

气相色谱法主要是将大肠***经过一系列衍生化的前处理后，为接下来的分析研究提供尽可能多的化学组分。大肠***的污染程度可以用顶空气相色谱法来分析，其原理是利用食品密封系统顶部的微生物代谢产物CO2对微生物进行分析。这种方法对食品质量安全检测有重大意义。与上述传统技术相比，此种方法具有检测速度快、灵敏度高的优点。

gao效液相色谱法（HPLC）主要是根据离子配对反相层析的原理来分析核酸。在长链DNA所携带的磷酸基团比较多，因此会有更多的TEAA与之相融合，其在柱内停留的时间增加。因为yi腈具有亲水性，可以通过其而将DNA分离，在具备一定的变性温度下，可以通过图谱显示明显的吸收峰。该技术具有准确度高、灵敏度高、成本低等优点，可大大提高工作效率。

酶底物法测定总大肠菌群的影响因素

环境因素的影响

对同一水样在自然环境下与无菌室中分别进行总大肠菌群和大肠埃希氏菌检测， 培养时间为 24 h，培养温度为( 36 ± 1) ℃ ，水样在自然环境下与无菌室内总大肠菌群和大肠埃希氏菌的检测值相对偏差在 10% 以内，样品T检验分析p＞0．05，监测值差异不显著，表明此方法对实验环境是否无菌没有严格的要求。