水中粪大肠菌群的常见检测方法

1、聚合酶链式技术

提取粪大肠菌群混悬液和待测水样的DNA，利用PCR技术扩增编码约260bp的LacZ***（β-半乳糖苷酶***）和约150BP的UdiA***（β-D-半乳糖苷酶***）的DNA，分别检测大肠菌群数和大肠***。

2、荧光原位杂交技术

由于粪大肠菌群特异的DNA序列，借助荧光标记的特异寡聚核苷酸片段作为的探针与待测水样中的DNA分子杂交，将杂交细胞经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量分析，确定菌群数。

目前，大肠菌群检测方法发展很快，已提高到分子生物学水平，使检测更快速、准确。酶底物法以其操作简便、检测周期短，将取代多管发酵法、滤膜法等传统方法，尤其是酶底物法采用密封培养技术，在检测***污水时可以减少人员接触而降低检测人员的致病风险，因此具有更强的实用价值和应用价值，正是目前水中粪大肠菌群的快速检测标准方法之一。

酶底物法检测总大肠菌群操作简便，检测时间短，结果可靠，无需确认试验，且可以同时检测水中大肠埃希氏菌的污染状况，能够较准确地判断水样的微生物污染状况.

酶底物法检测总大肠菌群结论

①酶底物法检测总大肠菌群和大肠埃希氏菌不受实验环境是否无菌的影响。

②此方法对总大肠菌群和大肠埃希氏菌的检测培养温度需严格控制在35～37 ℃ 间， 温度过高或者过低都会影响检测结果。

③此方法对总大肠菌群的检测培养时间在 22～ 28 h 之间可以得到准确结果， 而大肠埃希氏菌的检测则需 24～28 h;

④无论振荡培养或者静置培养对培养结果基本没有影响。

程控定量封口机工作原理： 加入含有总大肠菌群***的水样，目标***在Minimal Medium ONPG-MUG培养基中36℃±1℃培养，总大肠菌群***产生的特异性生物酶β一半乳糖苷酶能分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的色源底物ONPG,使培养呈现***；同时水样中大肠埃希氏菌产生特异性的β一葡萄糖醛酸酶分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的荧光底物MUG，产生特征性荧光。同样原理，耐热大肠菌群(粪大肠菌群)在44.5℃培养时会分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的色源底物ONPG，使培养基呈现***。