大肠菌群检验方法

***标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。　　乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。

　　分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。

　　证实试验：挑取平板上的ke疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。

　　报告：根据证实为大肠***阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。

所谓大肠菌群，是指在37℃培养24h 内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革蓝氏阴性无芽孢***的总称。主要由肠***科中四个属内的***组成，即埃希氏***属、柠檬酸***属、克雷伯氏菌属和肠***属。

水的大肠菌群数是指100 mL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群近似数(MPN)表示。在正常情况下，肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽孢***等多种***。这些***都可以随人畜排泄物进入水源，由于大肠菌群在肠道内数量多，所以，水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。目前，国际上已公认大肠菌群是粪便污染的指标。因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。

水中大肠菌群的检测方法，常用多管发酵法和滤膜法。多管发酵法可适用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要的时间较长。滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂质较多、易于堵塞滤孔的水样。

怎样检测饮用水中的大肠菌群？

(一)水样的采集

自来水取样：应在水龙头打开放水5分钟，再用无菌容器接取水样，待分析。如水样内含有余氯，则采样瓶灭菌后按每五百毫升水样加百分之三Na2S2O3.5H2O溶液一毫升。

(二)初发酵试验

1.水样稀释：制备水样10-1、10-2的稀释液，方法为用无菌移液管吸取水样10mL放于盛有90mL无菌水和若干玻璃珠的锥形瓶中，充分振荡使混合均匀，并使其中的***尽量呈单个存在，即为10-1稀释液;再从10-1制备10-2稀释液

2.接种和培养：以无菌操作于5支三倍浓缩培养基中各加入水样10mL，5支普通培养基试管中加入水样1mL，5支普通培养基试管中加入10-1稀释液1mL，小心混匀放入37℃培养箱中培养24h。此即5管法。

3.结果观察：37℃中培养24h后取出观察，观察有无气体和酸产生。在48h之间，培养管内倒置的杜汉氏小管内有任何量的气体积累，或培养基颜色从紫色变为***，便可初步断定为阳性反应。