所谓大肠菌群,是指在37℃培养24h 内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革蓝氏阴性无芽孢***的总称。主要由肠***科中四个属内的***组成,即埃希氏***属、柠檬酸***属、克雷伯氏菌属和肠***属。
水的大肠菌群数是指100 mL水检样内含有的大肠菌群实际数值,以大肠菌群近似数(MPN)表示。在正常情况下,肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽孢***等多种***。这些***都可以随人畜排泄物进入水源,由于大肠菌群在肠道内数量多,所以,水源中大肠菌群的数量,是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。目前,国际上已公认大肠菌群是粪便污染的指标。因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。
水中大肠菌群的检测方法,常用多管发酵法和滤膜法。多管发酵法可适用于各种水样的检验,但操作繁琐,需要的时间较长。滤膜法仅适用于自来水和深井水,操作简单、快速,但不适用于杂质较多、易于堵塞滤孔的水样。
水质大肠菌群酶底物法检测系统原理
一、检测用途:酶底物法测定用途:用于检测水中总大肠菌群粪大肠菌群(耐热大肠菌群)和大肠埃希氏菌。可用于检测水的类型:饮用水、水源水、废水、食品水、地表水、地下水、海水、瓶装水、中水、二次供水、管网水、畜牧用水、yi疗用水等。二、检测原理:酶底物法采用ONPG 和MUG 两种营养指示剂,这两种***分别可以被大肠菌群的 β-半乳糖苷酶和大肠***的 β-葡糖醛酸酶分解代谢。当大肠菌群在酶底物检测***中生长时,其使用 β-半乳糖苷酶分解代谢 ONPG,并使样品从无色变为***。大肠***使用 β-葡糖醛酸酶分解代谢MUG 时,能够发出荧光。
酶底物法 ( enzyme substrate technique)的原理是 :利用大肠菌群***能产生β2半乳糖苷酶 (β2D2galactosidase)分解 ON 2PG (O rtho2 nitrophenyl2β2D2galactopyranoside ) 使培养液呈*** ,检测水样中是否含有大肠菌群。利用大肠埃希菌产生 β2葡萄 糖 醛 酸 酶 ( β2glucuronidase ) 分 解 MUG ( 42 methyl2umbelliferyl2β2D2glucuronide)使培养液在波长 366 nm紫外光下产生蓝色荧光 , 检测水样中是否含有大肠埃希菌。酶底物法有商品化***供应 ,实验操作简便 ,无需确认试验 ,可同时检测水样中大肠菌群和大肠埃希菌。如果改变培养温度 ,还可检测耐热大肠菌群。该方法检测周期短 , 18 ~24 h 即可报告结果。可见该方法较大的特点是节省了时间和人力。
酶底物法测定总大肠菌群的影响因素
培养温度
总大肠菌群和大肠埃希氏菌的检测培养温度需严格控制在35~37℃,培养温度过高或过低均使检测结果不准确。
培养时间
总大肠菌群培养16~20 h 的检测结果与24 h相比均有显著性差异( p<0.05),培养22、28 与 24 h 结果差异不显著( p>0.05);而大肠埃希氏菌培养 16 ~22 h 的检测结果与 24 h 相比均有显著性差异( p<0.05),培养28 h与24 h结果无显著性差异( p>0.05)。此方法对总大肠菌群的检测培养时间在 22~28h之间可以得到准确结果,而大肠埃希氏菌的检测则需24~28h;无论振荡培养或者静置培养对培养结果基本没有影响。
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