水中粪大肠菌群的常见检测方法

1、聚合酶链式技术

提取粪大肠菌群混悬液和待测水样的DNA，利用PCR技术扩增编码约260bp的LacZ***（β-半乳糖苷酶***）和约150BP的UdiA***（β-D-半乳糖苷酶***）的DNA，分别检测大肠菌群数和大肠***。

2、荧光原位杂交技术

由于粪大肠菌群特异的DNA序列，借助荧光标记的特异寡聚核苷酸片段作为的探针与待测水样中的DNA分子杂交，将杂交细胞经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量分析，确定菌群数。

总大肠菌群***主要由以下4个菌属***组成：埃希氏菌属、柠檬酸菌属、克雷伯菌属和肠***属。这些菌属可以在人、畜粪便中检出，有的也可以在营养丰富的水体中检出，即非粪便污染的情况下，也有检出这些***的可能性。粪大肠菌群组成与总大肠菌群组成相同，但主要组成是埃希菌属，在此菌属中与人类生活密切相关的仅有一个种，即大肠埃希氏菌；柠檬酸菌属、克雷伯菌属和肠***属所占数量较少。

酶底物法 （ enzyme substrate technique）的原理是 :利用大肠菌群***能产生β2半乳糖苷酶 （β2D2galactosidase）分解 ON 2PG （O rtho2 nitrophenyl2β2D2galactopyranoside ） 使培养液呈*** ,检测水样中是否含有大肠菌群。利用大肠埃希菌产生 β2葡萄 糖 醛 酸 酶 （ β2glucuronidase ） 分 解 MUG （ 42 methyl2umbelliferyl2β2D2glucuronide）使培养液在波长 366 nm紫外光下产生蓝色荧光 , 检测水样中是否含有大肠埃希菌。酶底物法有商品化***供应 ,实验操作简便 ,无需确认试验 ,可同时检测水样中大肠菌群和大肠埃希菌。如果改变培养温度 ,还可检测耐热大肠菌群。该方法检测周期短 , 18 ～24 h 即可报告结果。可见该方法较大的特点是节省了时间和人力。