解淀粉芽孢***作为新的益生菌添加剂具有广阔的应用前景

目前，国内外研究人员对关于从植物及土壤中分离鉴定得到不同解淀粉芽孢***菌株的报道较多，并且进一步分析研究了其代谢产物，发现对多种植物病原***及***有较好的***效果；也有不少学者从动物粪便及肠道中分离得到新的解淀粉芽孢***，并将其作为益生菌添加剂添加到饲粮中用于动物生产，有较好***致病菌的效果，提高动物生产。解淀粉芽孢***作为新的益生菌添加剂具有广阔的应用前景，有必要进一步筛选出更适宜在饲粮中添加的新，使其能作为益生菌在畜牧养殖业中广泛应用。另外目前关于其抑菌机理及促生长等方面的报道并不多，因此还需要进一步进行深入研究，农业解淀粉芽孢***厂，在分子及***水平阐述作用机理。

MRS液体培养基里于试管中进行传代培养到20代

菌株的分离[14-15]：先取1 mL醋醅样品加入9 mL灭过菌的生理盐水中，然后依次做梯度稀释至10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6，然后用灭过菌的移液管各浓度吸取100 μL醋醅移至培养基上，在37 ℃的恒温培养箱中培养24～36 h后，观察单菌落，挑取不同形态、大小的单菌落进行划线纯化，3次分离纯化之后，对菌株进行革兰氏染色镜检，并确定菌株形态，将镜检菌株接种在MRS液体培养基里于试管中进行传代培养到20代，置于4 ℃冰箱保存，备用。

菌株的鉴定：对筛选得到的乳酸菌进行16S rDNA序列分析，确定其种属。将活化好的菌液，进行菌株的全***组脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid， DNA)的提取[16]，然后对***组DNA的16S rDNA区域进行PCR扩增，上游引物27F序列5′-AGAGTTTGATCCTGGCCTCA-3′，下游引物1492R序列：5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′，农业解淀粉芽孢***采购，扩增片段为1 500 bp。PCR体系50 μL：10×buffer 5 μL；脱氧核糖核苷酸三磷酸(deoxy-ribonucleoside triphosphate， dNTP) 5 μL；上游引物(25 μmol/L)0.5 μL；下游引物(25 μmol/L)0.5 μL；Taq DNA 聚合酶(250 U)0.5 μL；模板DNA 1.5 μL ；ddH2O 37 μL。PCR扩增条件为：95 ℃ 3 min；95 ℃ 10 s；55 ℃ 30 s；72 ℃ 1 min；72 ℃ 5 min，2～4反应步骤进行30个循环。扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测其纯度及浓度，农业解淀粉芽孢***，将达到测序要求的扩增产物送至上海华大***进行测序，将测序结果在美国国立生物技术信息中心(national center for biotechnology information， NCBI)上BLAST进行比对，并确定其种属。

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