TwistDx相关问题

1. RPA能实现多重化吗?

可以。RPA技术支持在同一个管中同时进行多个扩增反应。不过，多重化的引物组合需要精心设计，以便每个引物都能同样有效的工作。需要注意的是，RPA反应的引物总量(nmol)尽量不要超标太多。如果在-一个反应中使用两个以上的扩增引物，就应该控制不同引物的量。另外，我们应当事先考虑好检测多个扩增事件的探针、设备以及荧光团的兼容性。

2.能否对模板进行定量?

可以。扩增子达到可检出水平的时间，依赖于反应起始时的模板量。初始模板的拷贝越多，扩增子就越快达到可检出水平。不过，这种定量需要精心的实验安排，确保对照反应是同时开始的。举例来说，可以利用镁离子的添加时间进行控制。因为镁离子一一旦进入体系，RPA反应就会开始。此外，较慢的扩增过程有助于更精准的定量。我们可以通过调整反应条件或引物设计来减慢RPA的反应速度。

3能否进行荧光终点分析?

可以。这样比较的是反应开始时的荧光和反应结束时的荧光，荧光增强意味着发生了扩增。

4能否支持生物素或荧光标记的寡核苷酸?

支持。在RPA反应中，连有生物素或荧光团的引物与未修饰的引物表现差不多。据悉还没有发现任何差异。

5跑胶前需要回收RPA产物吗?

需要。RPA反应中的物质会干扰琼脂糖电泳，如果不进行产物回收，跑出来的带会出现拖尾。

TwistDx恒温扩增应用

TwistDx公司开发的重组酶聚合酶扩增（RPA），被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。以此为基础的TwistAmp 核酸扩增产品，能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。

RPA反应的适宜温度在37℃~42℃之间，无需变性，常温下即可反应，大大加快了PCR的速度。并且由于不需要温控设备，RPA可以真正实现便携式的快速核酸检测。RPA检测的灵敏度很高，能够将痕量的核酸（尤其是DNA）模板扩增到可检出水平，从单个模板分子得到大约1012扩增产物。无需复杂样品处理，即可实地检测；既可扩增DNA也可扩增RNA，省去额外的cDNA合成步骤；检测方式多样：终点检测、对扩增过程进行实时监控或通过侧流层析试纸条（LFD）读取结果。

***盒包括两类：①.TwistAmp冻干研发***盒（包括TwistAmp Basic***盒、TwistAmp exo ***盒和TwistAmp nfo ***盒共三种）；②. TwistAmp液态研发***盒（包括TwistAmp Liquid Basic ***盒和TwistAmp Liquid exo ***盒共两种）

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TwistDx

TwistDx Inc. 由分子生物学家兼蛋白生***学家 Niall Armes 博士以及 Derek Stemple 博士和 Nagesh Mahanthappa 博士于 1999 年共同创立，其总部位于英国马萨诸塞州剑桥市。TwistDx Limited 于 2002 年成立，其运营设施位于英国剑桥。

我们的愿景：TwistDx 希望将 RPA 分子检验和技术普及到所有可应用领域，使科学家和技术开发人员不再受到高温 DNA 扩增技术的束缚。