RPA 的概念

概念：重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)，被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性，反应温度在37°C左右。

TwistDx的未来

RPA核酸检测技术被誉为可替代PCR的犀利单分子检验技术，因为其灵敏，快速，对设备要求低，操作简易等特点。自其被开发出来之后，-直被广大科研工作者津津乐道。2009年，较大种子公司孟山都与TwistDx公司合作进行作物快速检测项目，旨在提高作物移交转让效率。近年来TwistDx根据RPA检测特点， 通过在基础体系中填加不同酶和探针，开发出多款研发型和实用型检测产品，以实现多样化的RPA应用。

TwistDx***盒

我国主要的几种检测***盒都是基于RT-PCR原理。因为需要检测的病毒样本浓度有高有低，高的容易检测，低浓度就会漏掉。所以PCR的方法就把病毒***扩增很多倍，达到可以检测出来的浓度。基本操作如下：

01  收集咽拭子等病毒样本，通过***打碎保护病毒的蛋白质壳子，萃取病毒RNA。一方面是萃取，另一反面，打碎之后就没有了性，相对安全一些。

02  由于这次新冠是单链RNA病毒，所以要先转换成cDNA。这个可以类比像是视频文件,mp4,rmvb,***i这些都是常见格式，同一个视频不同格式，意思都一样，可以互相转换。

03  常规PCR反应，加热到94℃把DNA拉链拉开，之后再55℃-60℃让引物，就是拉链扣分别套在两条拉链上，再升温到72℃让拉链自己，用左拉链做模板造一个右拉链，用右拉链做模板造一个左拉链。这样折腾一次为一个循环，RNA数量翻一倍。之后再折腾25-30次。这样就算很少量的病毒这个时候也显现出来了。

先说结论:目前的检测仍重度依赖核酸检测(以PCR技术为主)，检测速度较慢(大  部分需要2小时以上)，成本较高，且需要经训练的医护或实验人员来操控设备，因此无法实  现大规模快速检测。其他已商业化的快速检测***盒绝大多数依靠检测(IgG/lgM),可在10-  20分钟内获取检测结果，成本较低，操作简单，但是准确性较差，有较大的概率出现假阳性与假阴  性的情况，因此仅适用于大量地区粗略统计人数以及比例，或作为核酸检测的辅助指  标，其检测结果无法作为确定检测者与否的决定性指标，而目前能实现快速检测(10-20分  钟)且确保准确性的方法之一抗原检测，尚未有成熟的产品面世，仅有少数科技公司宣称近完成了产品开发。此外，基于CRISPR的检测技术的***盒可以为认为是核酸检测技术与检测  技术的一个折中，准确性高，速度较快，成本较低且操作简单，但由于技术相对新  颖，只有少数公司与研究机构完成了***盒的开发，产品尚未大规模推广。