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自PCR技术诞生以来已经有三十年了。从经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR，这一技术在不断蜕变却从未淡出我们的视野。近年来，等温扩增技术的兴起无疑是对PCR的巨大挑战。

等温扩增技术的***快速诊断方法,涉及生物检测技术领域,具体是用体外生物检测***快速检测病原微生物的一种技术。

包括如下步骤:一、对被检样品进行预处理;二、包括目标靶***数据库的建立;生物信息学的分析比较;***组多态性的分型处理和简并碱基的运用,获得各种靶***的特异性引物两对,分别与靶***中的六个***区域序列特异性匹配;三、进行等温扩增反应;四、分析判断结果。该方法的优点:不需特殊***与设备;高特异性;.灵敏度高;鉴定简便;用途广: 可用于食品、***、化妆品等领域的质量控制和环境、水质等监测;用于***临床诊断,用于代谢性***和遗传***的***诊断。

RPA 的概念

概念：重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)，被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性，反应温度在37°C左右。

如何提高扩增曲线的可重复性?

A 优化扩增曲线考虑以下因素: 对于低拷贝数模板，不稳定扩增可能是因为达到检测限或者是反应混匀程度不同（未混匀的反应扩增效率不佳）。另外，在低温情况下存贮，重组酶和辅助蛋白在50%甘油情况下形成沉淀,也是可能导致不稳定扩增的原因。所以，20x主要反应mix在室温下解冻并震荡涡旋将使其成为液体，不影响其功能,并且有效提高扩增效率。不稳定扩增也可能是因为master mix量不足，在加入体系前，用户必须保证震荡后20x主要反应组分均一。