恒温扩增***盒原理

本***盒采用恒温荧光检测技术，通过Bst聚合酶及特异性引物在等温条件下对样本中的目的片段进行特异性扩增，结合核酸染料或检测仪器使用，通过反应液颜色的变化或者相关仪器判断结果。

   检测样品类型 人源性、动植物源性的病原体及其他***、***、病毒等的核酸。

   反应条件 反应温度：63℃；

   反应时间：20~60min；

   反应仪器：恒温金属浴/ESETubeScanner/荧光PCR仪/GenieII/浊度仪。

   检测方法 染料法、浊度法、荧光法

恒温扩增常用酶

恒温扩增的方法多种多样，其对应的酶体系也各有差别，且一般为多酶体系，在酶原料选择上相比PCR复杂，下面只列举一些主要的恒温扩增方法相关酶。

LAMP相关酶环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)所用酶主要为具有链置换功能的DNA聚合酶，详细原理可参考聊聊恒温扩增技术。常用酶为Bst DNA聚合酶，用于DNA链合成，同时具有链置换功能；若检测模板为RNA，则可加入逆转录酶配制成RT-LAMP反应体系。

恒温扩增***盒有哪些常用酶

TMA相关酶

依赖转录介导扩增(Transcription mediated amplification, TMA)的扩增模板为RNA或单链DNA，检测的扩增产物为RNA，详细原理可参考转录介导的核酸扩增技术小结。该体系所用酶有两种：M-MLV逆转录酶：用于模板RNA逆转录成DNA，并在逆转录过程中通过引物引入转录启动子序列，用于后续转录过程；T7 RNA聚合酶：以逆转录形成的DNA为模板，转录合成检测产物RNA。

恒温扩增***盒操作步骤

提前30分钟将***盒所需组分取出,室温融化。鹿荡混匀。

1).每个干粉反应管加入29.4 uL Abuffer (注意: Abuffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产“生影响) ; 1.每个干粉反应管加入29.4 uLAbuffer (注意: Abuffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产生影响) ;

2.每个反应管分别加入2 uL上游引物、2 uL下游引物和0.6 μ探针(引物和探针浓度为10 μM ,对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中)