恒温快速扩增***盒应在怎样的温度下使用？

标准的ERA扩增***盒经过配制可在37℃-42℃的温度范围内操作。过高的温度会对反应体系产生不利的影响，因为酶会逐渐地失去全部活性。对于RT***盒，我们建议客户在40℃下运行反应，因为逆转录酶在稍高温度下具有更高的活性。

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恒温扩增***盒常用酶简介

RPA相关酶

重组酶聚合酶扩增技术(Recombinase Polymerase Amplification, RPA)是一种多酶协作的反应体系，详细原理可参考充满想象力的恒温扩增技术:RPA、RCA、SDA、HDA。该体系反应酶包含三种：重组酶：可与引物结合形成复合体，***至与引物同源的靶序列，促使引物与模板结合，同时帮助DNA解链，以便启动扩增；单链DNA结合蛋白：可与被置换出的DNA单链结合，稳定单链结构；DNA聚合酶：如Bsu DNA聚合酶，用于DNA链合成，同时具有链置换功能。对于RNA模板，需在反应中加入逆转录酶形成RT-RPA体系；若利用标记探针进行检测，还需加入核酸酶对探针序列进行切割，常用核酸酶有核酸内切酶 IV(Endonuclease IV, nfo)和核酸外切酶 III(Exonuclease III, exo)，或者可与CRISPS/Cas系统搭配使用。

科普｜恒温扩增***盒常用酶原料

NEAR相关酶

切口酶扩增反应(Nicking Enzyme Amplification Reaction, NEAR)是一种基于切刻内切酶切割特性的恒温扩增方法，详细原理可参考啥黑科技可10分钟完成核酸分子检测？。其使用的酶有两种：切刻内切酶：如Nt.BstNBI切刻内切酶，该类酶不同于常规限制性内切酶，其识别特定序列后仅在DNA其中一条链上切割形成缺口，并暴露出游离的3’端；DNA聚合酶：如Vent (exo-) DNA聚合酶或Bst DNA聚合酶，用于DNA链合成，同时具有链置换功能。