恒温扩增***盒原理

本***盒采用恒温荧光检测技术，通过Bst聚合酶及特异性引物在等温条件下对样本中的目的片段进行特异性扩增，结合核酸染料或检测仪器使用，通过反应液颜色的变化或者相关仪器判断结果。

   检测样品类型 人源性、动植物源性的病原体及其他***、***、病毒等的核酸。

   反应条件 反应温度：63℃；

   反应时间：20~60min；

   反应仪器：恒温金属浴/ESETubeScanner/荧光PCR仪/GenieII/浊度仪。

   检测方法 染料法、浊度法、荧光法

恒温快速扩增***盒常用酶原料

尿DNA糖基化酶尿DNA糖基化酶(UDG酶)又称尿-N-糖基化酶(UNG酶)，可水解含尿的单链和双链DNA释放出游离尿，而对RNA无活性，与dUTP搭配使用，可建立成PCR防污染体系。其原理如下：在PCR体系中将dTTP部分或全部替换为dUTP后，使得反应生成含有dU碱基的扩增产物，这些扩增产物不同于天然模板，在进入含有UDG酶的反应体系时，可被UDG酶识别并切割尿碱基与糖磷酸骨架间的N-糖基键，而经切割后的DNA链在碱性或高温条件下易于断裂降解，从而失去被当作模板再扩增的能力，因此可防止扩增子污染（如下图）。市面上的UDG酶主要有普通型和热敏型，其中热敏型UDG酶在室温条件下即可催化反应，50℃以上加热可使其灭活，防止其降解后续PCR形成的含dU扩增产物。虽然UDG/dUTP体系具有防污染功能，但在实际测试中还得兼顾PCR的效率和灵敏度。一方面需确保PCR扩增产物掺入足够量的尿碱基，从而可被UDG有效切割；另一方面也需要保证反应体系添加的dUTP不会明显影响PCR效率，因此dTTP和dUTP的佳比例需通过优化确定。

恒温扩增***盒设计及储存

荧光探针设计:

在上下游引物中间,设计- -段长度为46-52nt与目的片段互补的序列作为荧光探针;

探针序列不与特异性引物识别位点重叠,长度为46-52 nt ,序列避免回文序列、内部二级结构和连续的重复碱基。

***盒储存:

运输条件:低温运输;

储存条件:储存温度≤-20°C ,避光保存,避免重压、反复冻融:

产品有效期: 12个月。