恒温扩增***盒
本***盒可以用于RT-LAMP等温扩增,RT-LAMP即逆转录和Loop-Mediated Isothermal Amplification(环介导等温扩增)的结合,专门用于快速扩增RNA。LAMP是2000年才出现的一种新颖的等温核酸扩增方法。它利用4或6条模板专一的特异引物和具有链置换能力的DNA聚合酶,在等温条件下(63℃左右)30-60分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于RT-PCR技术,同时还不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程,不依赖任何专门的仪器设备。目前已成功应用于人类及动植物、***、***等病原体的快速检测。
原理概述:
本***盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术:在恒温条件下(42 °C),特殊修饰的反转录酶利用特异性引物DNA和模板RNA合成cDNA链,反应体系中的重组酶、单链DNA结合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA链为模板进行快速核酸扩增反应。适用于实验室级别的RNA扩增以及其他检测用途的RNA扩增使用。
产品特点:
本***盒具有灵敏度高、特异性强、反应时间短(仅需30 mins)等优点,反应组分为干粉状态,操作简便,易于保存。
本***对设备要求低,金属浴、水浴锅等即可进行反应操作,无需购买PCR扩增仪等价格高昂的专属设备。
恒温扩增***盒操作步骤
提前30分钟将***盒所需组分取出,室温融化。鹿荡混匀。
1).每个干粉反应管加入29.4 uL Abuffer (注意: Abuffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产“生影响) ; 1.每个干粉反应管加入29.4 uLAbuffer (注意: Abuffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产生影响) ;
2.每个反应管分别加入2 uL上游引物、2 uL下游引物和0.6 μ探针(引物和探针浓度为10 μM ,对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中)
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