***与仪器
试 剂: pET28a-mrj 转 Rosetta 菌 0种 由 本 实 验 室 所保存。免0疫佐剂 quickantibody 购自北京康碧泉公司;HAT 选择性培养基、HT 培养基、8-Azaguanine 和融合*** 50% PEG 购自美国 Sigma 公司; 胎牛血0清及 PRMI 1640 培 养 基 为 Hyclone 产 品; 辣 根 过 氧 化 物 酶( HRP) 标记山羊抗小鼠 IgG ; 8 周龄雌性健康 BALB / c 小鼠,本实验室饲养; 小鼠骨0髓瘤细胞 SP2 /0 由南京大学赠送,融合前两星期复苏并经 8-Azaguanine筛选; 其他***均为国产分析分析纯。
仪器: 二 氧 化 碳 培 养 箱( Thermo) ; 倒 置 显 微 镜( Olympus) ; 细胞培养耗材,96 孔板、24 孔板、6 孔细胞培养板、移液***( Corning) ; 1 mL 的 A 蛋白层析柱
产品描述
抗原特异性CD4+ TH1和CD8+ CTL细胞在胞内感0染和肿0瘤的发生0发展过程中具有重要作用,因此成为相关***的免0疫学研究和疫0苗研发的重要内容。蛋白抗原(包括灭活病原微生物、肿0瘤细胞裂解物、重组或提取的蛋白抗原、合成肽等)在氢氧化铝等常规佐剂作用下不能有效诱生抗原特异性CD4+ TH1和CD8+ CTL反应。Quick CTL细胞免0疫佐剂是一种具有自主知识产权、独0特配方的新型水溶性细胞免0疫佐剂,能够作为蛋白抗原佐剂免0疫小鼠诱生有效的抗原特异性CD4+ TH1和CD8+ CTL反应。
1. 第21天按同样方式加强免0疫1针。备注:每次佐剂和抗原现配现用。
2. 第35天采微量血进行ELISA测定,抗0体滴度应在1:10000-1:10000000范围内,随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免0疫和脾细胞融合。
3. 若抗0体滴度没有达到要求,可在第42天按同样方式加强免0疫1针。备注:通常情况下小鼠只需免0疫2针,而家兔往往需要免0疫3针。
4. 若免0疫3针,可在第52-56天采微量血进行ELISA测定,抗0体滴度应在1:10000-1:1000000范围内,随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免0疫和脾细胞融合。备注:佐剂免0疫效果有时也与抗原特性有关,若免0疫3针后仍达不到要求,不建议进行更多针次免0疫。
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