转染***简介:
其中病毒载体的特点是整和效0率高, 可使外源***在宿主细胞中长期表达,缺点是存在潜在的安全***性。电穿孔法及显微注0射法的特点是转染率较高,缺点是需要昂贵的仪器,前者对细胞的损伤较大,后者在导入DNA 时需要一个细胞一个细胞地注0射,不适合大量细胞研究的需要。
人们一直在寻找更有效、毒性小同时对研究影响也小的转染***。由于脂质类转染***对细胞的毒性是由其脂质特性决定的,众多的研究者和生物公司将新一代转染***的开发聚焦在非脂质体的聚合物上,并已有一些优0秀的***产品上市。
注意事项:
1. 质粒 DNA:请用能够去除内毒0素的方法制备高质量的质粒 DNA。
2. 稀释液:0.85%(W/V)生理盐水,用低内毒0素纯水配制,高压消毒或除0菌过滤。
3. 培养基:经过 DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常规培养基测试,推荐使用含 5~10%牛血0清的
DMEM,若转染效果不理想可尝试其它培养基。
4. 以 24 孔细胞板转染实验为例,推荐每孔低内毒0素质粒 DNA 用量为 2μg、转染***用量为 3~5μl,请
在正式实验前根据不同细胞和不同培养基用报告***进行优化。
5. 如果实验目的在于筛选抗药性稳定细胞系,可在细胞传代后尚未贴壁时直接进行转染,从而可节省
18~24 小时的转染前细胞培养时间。
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