自备材料：

1、细胞计数器

2、细胞冻存管

3、超低温冰箱或液氮

4、超净工作台

操作步骤(仅供参考)：

1、培养细胞至对数生长晚期，显微镜观察其外观、形态、有无污染等，取状态良好的细胞进行冻存操作。如为贴壁生长细胞，用胰蛋白酶消化并用完全培养基终止消化，进行细胞计数；如为悬浮生长细胞，进行细胞计数。

2、500～1000g离心5min，弃上清。

3、加入适量的通用细胞冻存液，重悬细胞，使细胞浓度达到1～10×106/ml，置于冻存管中，密闭、不要拧的太紧，避免弯曲变形。

4、一般遵循1℃/min的速率进行冷冻。亦可采用4℃20min，-20℃30min，-70℃过夜，***后置于液氮罐中长期存储。

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1. 按每管1ml分装到细胞冻存管中。

2. 直接放入-70℃冰箱中冻存。

备注：无需程序降温盒或从4℃到-20℃到-70℃冰箱的繁琐程序降温。

3.24小时后转入液氮中冻存。

备注：对于不同细胞，使用本细胞冻存液也可在-70℃冰箱中保存数周甚至数月，但建议***好尽快转入

液氮中保存。

4.复苏方法同常规细胞冻存液。

备注：对于大多数对DMSO不敏感的细胞，复苏时甚至传代前无需去除细胞冻存液，实际上本细胞冻存

液中某些成分具有一定的促细胞生长特性。