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博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类齐全的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。
水佐剂是一种用于制备小鼠单克0隆抗0体和多克0隆抗0体的免0疫佐剂,与常规使用的弗氏佐剂相比,具有免0疫针次少、抗原用量低、抗0体产生快、抗0体滴度高、抗0体亲合力高、不***抗原天然构象和使用方便等优点。
水佐剂使用重要提示
1、水佐剂只需两针免0疫,无论是用于单克0隆还是多克0隆抗0体制备,与弗氏佐剂相比可至少减少两针次免0疫。
2、水佐剂通过减少免0疫针次和降低每针次抗原用量,从而可大大节省总抗原用量。推荐使用的抗原用量为
(1)免0疫原性较弱的亚单位蛋白每针次1~50μg(通常为10~20μg);
(2)免0疫原性较强的灭活全病毒和病毒样颗粒每针次0.1~10μg(通常为1~2μg)。
3、水佐剂抗0体产生快,抗0体滴度高,抗0体亲合力高,无论是用于单克0隆还是多克0隆抗0体制备,只需要在三周内进行两针免0疫,通常在第五周即可获得ELISA滴度高1:10000~1:10000000的高亲合力抗0体水平。
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单克0隆抗0体(单抗制备)制备过程有以下几个步骤:
步骤一:细胞免0疫
免0疫动物免0疫动物是用目的抗原免0疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。 一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠,按照预先制定的免0疫方案进行免0疫注0射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免0疫器0官,刺激相应B淋巴细胞克0隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。
步骤二:细胞融合
采用眼球摘除放血法处死小鼠,无菌操作取出脾0脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨0髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合,并加入促融合剂聚乙 二醇。在聚乙 二醇作用下,各种淋巴细胞可与骨0髓瘤细胞发生融合,形成杂交瘤细胞。
在血液、和***液里的抗0体主要是IgM和IgG。在正常血浆中,IgM约占血浆内总抗0体量的10%。IgM的杀菌、溶菌、促进吞噬作用及凝集抗原的作用都比IgG强,它也能中和***外和阻止病毒。人若缺乏IgM,可能引起致死性的。IgG占血浆内抗0体总量的70%~0%,由于它的分子量较小,通透性大,所以在体内分布。它能进入***液和脑脊液内;并能通过进入胎儿体内。IgA具有明显的和抗病毒作用,分泌型的IgA存在外分泌物中,如初乳、泪液、唾液、胆汁以及消化道、呼吸道和尿、生殖道的粘膜分泌液中。而且,血液中的,IgA也能在里形成大量分泌型IgA,由胆汁排人十二指肠,构成外界物质通向体内的道防线,阻止上述管腔内的抗原物质在管壁附着。因此,IgA是抗粘膜的一个重要抗0体,使整个内脏的功能都能得到增强。
每种抗0体与特定的抗原决定基结合。这种结合可以使抗原失活,也可能无效但有时也会对机体造成病理性损害,如抗核抗0体、抗双链DNA抗0体、抗甲状腺球蛋白抗0体等一些自身抗0体的产生,对***可造成危害。
(1)初次反应产生抗0体:当抗原次进入机体时,需经一定的潜伏期才能产生抗0体,且抗0体产生的量也不多,在体内维持的时间也较短。
(2)再次反应产生抗0体:当相同抗原第二次进入机体后,开始时,由于原有抗0体中的一部分与再次进入的抗原结合,可使原有抗0体量略为降低。随后,抗0体效价迅速大量增加,可比初次反应产生的多几倍到几十倍,在体内留存的时间亦较长。
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