1.运输、储存和有效期
常温运输(勿超过 30℃),2-8℃储存。正常储存条件下自生产之日起有效期 2 年。
2.操作方法
将标本与本产品室温孵育 10 分钟后,用 Tris 或 PBS 冲洗。
3.注意事项
内源性碱性活性在很多细胞和***中很强,如膀胱上皮细胞、卵0巢固有层、shen脏和唾液腺。小0肠碱性磷酸酶常见于在小0肠上皮细胞的刷状缘;人0胎0盘的碱性磷酸酶常见于胎0盘合体滋养层细胞的微绒毛;在细胞涂片中,碱性磷酸酶见于嗜中性分割细胞,嗜中性带细胞,和嗜中性晚幼粒细胞。碱性磷酸酶也见于慢性和急性粒细胞白0血病以及某些嗜中性粒细胞白0血病反应。
1. 检测细胞或***中是否含有内源性过氧化物酶的方法:将***切片水化后,加入底物DAB,如果变为棕色,说明***切片含有过氧化物酶,需要封闭内源性过氧化物酶活性。
2.检测细胞或***中是否含有内源性碱性磷酸酶的方法:将***切片水化后,加入底物BCIP/NBT,如果变为棕色,说明***切片含有内源性碱性酶,需要封闭其活性。
3.影响过氧化物酶的分子有血红素蛋白如红细胞中的血红蛋白,肌肉细胞中的肌红蛋白,粒细胞和单核细胞中的细胞色素及肝0脏和shen脏之中的触媒。
加生物素化抗0体
1. 去掉缓冲液,擦掉切片周围的液体。
2. 加生物素化抗0体,完全覆盖切片。
3. 室温孵育 30min。
4. 用洗涤液洗去抗0体,用洗涤液润洗 5min。
加亲合素-HRP
2. 加亲合素-HRP,完全覆盖切片。
4. 用洗涤缓冲液洗去亲合素-HRP,用洗涤缓冲液润洗 5min。
显色
1. 加显色液(自备)显色。
可能出现的问题和解决方法
注意事项
1. 用辣根过氧化物酶时不要使用含有叠氮钠的***。
2. 避免使用含次氯酸的去污剂。
3. 设阳性对照、阴性对照和***对照。
4. 不要使用卵清蛋白作为切片粘连剂,使用明胶或多聚赖氨酸。
5. 孵育过程中不要使片子干掉。
6. 洗涤后洗涤液尽量去净。
7. 用低熔点石蜡以减少抗原变性(> 60°C)。
8. 用新鲜配制的 4%缓冲多聚甲醛可更好保存抗原活性。
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