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使用方法

1. 将新鲜消化的 BHK-21 细胞接种到 24 孔细胞板中，每孔 1~2×105细胞，1ml 完全培养基。备注：可在生长旺盛的细胞传代后直接按下述步骤 2~5 进行转染，无需 18~24 小时的等候时间。

2. 将 2μg 质粒 DNA 和 3~5μl 转染***分别稀释到 50μl 生理盐水中。备注：质粒 DNA 和转染***的***适用量需要根据不同培养基来优化，但理论上不超出 1~2μg 和 3~5μl 范围。

3. 合并上述两溶液并混匀。备注：无需其它转染***所需的 10~30 分钟的等候时间。

4. 将上述复合物直接加入到细胞培养基中，用加样器吸打混匀。备注：转染复合物可直接加入含血0清的细胞培养基中进行转染。

5. 将细胞板移至 37oC/5% CO2 孵箱中进行培养。备注：无需在转染后 4~6 小时补加血0清或更换培养基。

6. 24~72 小时后根据实验需要进行瞬时表达分析或稳定细胞系加压筛选。

注意事项：

1. 质粒 DNA：请用能够去除内毒0素的方法制备高质量的质粒 DNA。

2. 稀释液：0.85%（W/V）生理盐水，用低内毒0素纯水配制，高压消毒或除0菌过滤。

3. 培养基：经过 DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常规培养基测试，推荐使用含 5~10%牛血0清的DMEM，若转染效果不理想可尝试其它培养基。

4. 以 24 孔细胞板转染实验为例，推荐每孔低内毒0素质粒 DNA 用量为 2μg、转染***用量为 3~5μl，请在正式实验前根据不同培养基用报告***进行优化。

5. 立传立转要求使用生长旺盛的细胞，即细胞生长至 80-90%成片或刚长满。若使用生长过老的细胞，将明显影响立传立转的效率。

6. 立传立转对细胞状态要求较高，如果转染效果不理想，可按 QuickShuttle-Enhanced 的转染方法（见本说明书第 4 页），在细胞贴壁后进行标准转染操作。

将上述复合物直接加入到细胞培养基中，轻摇细胞板或用加样器吸打混匀。备注：转染复合物可直接加入含血0清的细胞培养基中进行转染。在极0少情况下会出现贴壁细胞脱落现象，可先从待转染细胞孔中吸取 500μl 培养基与转染复合物预混后再加入细胞中。若在细胞瓶中进行转染，直接加入到无细胞贴壁的对面或侧面并摇匀即可。