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实验步骤:
1、弃去板内液体,洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。再在每个标本的6孔中分别加入6种酶标二抗各100μl,通用阳性、阴性对照的各孔也一样。在加样图上或酶标板上做好标记。贴上封板膜37℃温育30分钟。
2 、吸弃板内液体,洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。每孔分别加入显色剂 A 和显色剂 B 各50μl,换一张新的封板膜贴板避光37℃显色20分钟。
3 、ELISA***盒特异性好一般肉眼即可观察出结果,看显色蓝的那个孔所对应的酶标二抗就知道此标本的 Ig 类或亚类。更可将反应终止液(每孔50μl)终止反应后用酶0标仪450nm 测长,630nm 参考波长双波长测定结果,参看高值孔所对应的酶标二抗就知道此标本的 Ig 类或亚类(阳性对照 OD 一般不小于0.8,阴性对照一般不高于0.15,阳性判定标准:样品 OD 大于阴性 OD+0.15,阴性 OD 低于0.05按0.05算)。
博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类齐全的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。
在血液、和***液里的抗0体主要是IgM和IgG。在正常血浆中,IgM约占血浆内总抗0体量的10%。IgM的杀菌、溶菌、促进吞噬作用及凝集抗原的作用都比IgG强,它也能中和***外和阻止病毒。人若缺乏IgM,可能引起致死性的。IgG占血浆内抗0体总量的70%~0%,由于它的分子量较小,通透性大,所以在体内分布。它能进入***液和脑脊液内;并能通过进入胎儿体内。IgA具有明显的和抗病毒作用,分泌型的IgA存在外分泌物中,如初乳、泪液、唾液、胆汁以及消化道、呼吸道和尿、生殖道的粘膜分泌液中。而且,血液中的,IgA也能在里形成大量分泌型IgA,由胆汁排人十二指肠,构成外界物质通向体内的道防线,阻止上述管腔内的抗原物质在管壁附着。因此,IgA是抗粘膜的一个重要抗0体,使整个内脏的功能都能得到增强。
每种抗0体与特定的抗原决定基结合。这种结合可以使抗原失活,也可能无效但有时也会对机体造成病理性损害,如抗核抗0体、抗双链DNA抗0体、抗甲状腺球蛋白抗0体等一些自身抗0体的产生,对***可造成危害。
(1)初次反应产生抗0体:当抗原次进入机体时,需经一定的潜伏期才能产生抗0体,且抗0体产生的量也不多,在体内维持的时间也较短。
(2)再次反应产生抗0体:当相同抗原第二次进入机体后,开始时,由于原有抗0体中的一部分与再次进入的抗原结合,可使原有抗0体量略为降低。随后,抗0体效价迅速大量增加,可比初次反应产生的多几倍到几十倍,在体内留存的时间亦较长。
人们抽取动物的血液,分离出含抗0体的。这种体内生产抗0体的传统方法有许多缺点。例如所获得的抗0体不纯,不能连续生产,动物饲养与管理工作繁重等,故长期以来***家们一直在探索在试管内(即体外)生产抗0体的方法, 1976年英国剑桥大学两位科学家Milstein和Koh1er将小鼠瘤细胞与小鼠的脾细胞杂交。小鼠瘤细胞能在体外增殖传代并能分泌无抗0体活性的球蛋白;小鼠脾细胞能产生针对某种抗原的抗0体,但不能在体外增殖。将两者融合成一种杂交瘤细胞,后者继承了两个亲代细胞的特点,既可在体外增殖,又可产生针对某种抗原的抗休。一个杂交瘤细胞在体外不断增殖所形成的细胞集团,被称之为。
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