生物素-酪胺信号放大***盒（HRP底物）   酪胺信号放大技术（TSA, Tyramide signal amplification）主要原理是，在过氧0化氢存在情况下，标记在抗0体上的HRP将底物酪胺活化，后者与相邻的蛋白上的酪氨酸残基生成稳定的共价结合，因此这些蛋白（如HRP、抗0体）上会富集大量带有生物素标记的酪胺，使信号被有效放大。生物素为小分子化合物，分子量244。亲和素与生物素有极高的亲和力，结合牢固，而且特异性高，每个亲和素可结合4个生物素。用小分子生物素与HRP酶标记的亲和素发生特异性反应，可减小抗原抗0体反应的空间位阻，使反应明显放大。

1. 检测细胞或***中是否含有内源性过氧化物酶的方法：将***切片水化后，加入底物DAB，如果变为棕色，说明***切片含有过氧化物酶，需要封闭内源性过氧化物酶活性。

2.检测细胞或***中是否含有内源性碱性磷酸酶的方法：将***切片水化后，加入底物BCIP/NBT，如果变为棕色，说明***切片含有内源性碱性酶，需要封闭其活性。

3.影响过氧化物酶的分子有血红素蛋白如红细胞中的血红蛋白，肌肉细胞中的肌红蛋白，粒细胞和单核细胞中的细胞色素及肝0脏和shen脏之中的触媒。

通用步骤

加血0清封闭液

1. 去掉片子上多余缓冲液。

2. 取适量血0清封闭液完全覆盖切片。

3. 在湿盒中室温孵育 15min。

4. 浸入洗涤缓冲液中 5min。

加一抗

1. 去掉切片上的多余洗涤缓冲液。

2. 将稀释的一抗加到切片上，完全覆盖***细胞。

3. 在湿盒中室温孵育 30min。

4. 用洗涤缓冲液洗去一抗，在洗液中润洗 5min。

注：如果显色速度过快，建议进一步稀释一抗，将一抗稀释度以 1/50、1/100、1/200、1/400 和 1/800，***佳稀释度的选择是显色 10min 后阳性显色效果满意而没有背景显色。