脂质体转染***价格合理「博特龙」
作者:博特龙2022/6/15 7:18:50






转染(transfection)指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。DNA转染技术的发展对现代分子生物学产生了巨大的影响。***转染技术不仅是研究转0***和***表达的重要工具,而且是***治0疗的关键步骤。理想的***转染***应该具有如下特点:高0效转染;安全;低细胞毒性;方法简单;省时、经济。




转染***简介:

其中病毒载体的特点是整和效0率高, 可使外源***在宿主细胞中长期表达,缺点是存在潜在的安全***性。电穿孔法及显微注0射法的特点是转染率较高,缺点是需要昂贵的仪器,前者对细胞的损伤较大,后者在导入DNA 时需要一个细胞一个细胞地注0射,不适合大量细胞研究的需要。

人们一直在寻找更有效、毒性小同时对研究影响也小的转染***。由于脂质类转染***对细胞的毒性是由其脂质特性决定的,众多的研究者和生物公司将新一代转染***的开发聚焦在非脂质体的聚合物上,并已有一些优0秀的***产品上市。





磷酸钙在良好的转染条件下,可以在293T等细胞的转染达到较高的转染效率。但磷酸钙转染有一个突出的问题,非常不稳定,尤其受PH值的影响非常大,在实验中使用的每种***都必须小心校准,保证质量,因为甚至偏离***优条件十分之一个PH都可能导致磷酸钙转染的失败,经常即使***熟练的转染实验者也不能保证每次磷酸钙转染的成功,他们可能经常为莫名其妙的转染失败而沮丧。同时,他们还经常发现,往往小体积的转染比如6孔板以下的转染效果比较理想,可一换到大皿,经常转染效率下降很快。磷酸钙的先天缺陷往往是实验梗阻的主要原因。




注意事项:

1. 质粒 DNA:请用能够去除内毒0素的方法制备高质量的质粒 DNA。

2. 稀释液:0.85%(W/V)生理盐水,用低内毒0素纯水配制,高压消毒或除0菌过滤。

3. 培养基:经过 DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常规培养基测试,推荐使用含 5~10%牛血0清的

DMEM,若转染效果不理想可尝试其它培养基。

4. 以 24 孔细胞板转染实验为例,推荐每孔低内毒0素质粒 DNA 用量为 2μg、转染***用量为 3~5μl,请

在正式实验前根据不同细胞和不同培养基用报告***进行优化。

5. 如果实验目的在于筛选抗药性稳定细胞系,可在细胞传代后尚未贴壁时直接进行转染,从而可节省

18~24 小时的转染前细胞培养时间。







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