转染***盒免费咨询「博特龙」
作者:博特龙2022/6/11 22:32:00






已有众多的文献报道,脂质体本身会参与细胞生理活动,引起***表达的上调或下调。如参与PKC(蛋白激酶C)通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30);如***ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8);如与线粒体膜发生作用(J Biol Chem. 1989 Jan 25;264(3):1508-15);转染siRNA造成脱靶效应等等。细胞毒性的大小往往意味着对细胞生理活动影响的大小,脂质体这些作用是造成细胞毒性的根本原因。这会对相关研究数据产生严重的干扰,甚至影响研究的结论。这已引起了许多研究者的注意。




以高分子聚合物为载体的***传递技术正成为人们研究的方向。但应用的阳离子聚合物转染***,仍然存在转染效率不高和细胞毒性的问题。***新的高分子聚合物转染***是纳米聚合物转染***,由于采用新技术和新材料,具有高0效、安全、低细胞毒性。其原理是:分子内含有许多氨基,在生理PH下会发生质子化,这些质子化的氨基可以中和DNA质粒表面的负电荷,使DNA分子由伸展结构压缩为体积相对较小的DNA粒子,并包裹在其中,使DNA免受核酸酶的降解。转染复合物主要是通过细胞内吞作用将DNA转移进入细胞,形成内含体(endosome),DNA从内含体释放,进入细胞质中,再进一步进入核内转录、表达。通过纳米技术生产出的转染***在纳米尺度表现出结合保护DNA能力强、毒性低的独0特性能。




使用方法:

1. 转染前 18~24 小时接种细胞到 24 孔细胞板中,每孔 5~10×104细胞,1ml 完全培养基。备注:如果筛选抗药性稳定细胞系,可以考虑简化的实验步骤,即在细胞传代后直接按下述步骤 2~5 进行转染,无需 18~24 小时的等候时间。

2. 将 2μg 质粒 DNA 和 3~5μl 转染***分别稀释到 50μl 生理盐水中。备注:质粒 DNA 和转染***的***适用量需要根据不同培养基来优化,但理论上不超出 1~2μg 和 3~5μl 范围。

3. 合并上述两溶液并混匀。备注:无需其它转染***所需的 10~30 分钟的等候时间。






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重要提示

1. 与常规转染***不同,使用 QuickShuttle 可在贴壁细胞传代后尚未贴壁时直接进行转染(立传立转),从而可节省 18~24 小时的转染前细胞培养时间。

2. QuickShuttle 极大简化了转染操作,转染***和质粒混合后无需室温静置孵育,可直接加入含血0清的细胞培养基中进行转染,而且无需在转染后补加血0清或更换培养基,整个转染操作可在一分钟内完成。

3. 立传立转、一分钟完成转染操作和高转染效率等优点使得部分使用 QuickShuttle 的转染实验可在细胞传代后 24 小时内完成,从而比常规转染***节约 24~48 小时。



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