Multi-tag多表位标签蛋白

      Multi-tag多表位标签蛋白是通过大肠杆0菌表达的已知抗原表位标签的融合蛋白，用于Western Blot阳性对照。融合蛋白中含有***i-tag、Calmodulin-tag、polyglutamate-tag、E-tag、3×FLAG-tag（FLAG-tag包含在其中）、HA-tag、His-Tag、Myc-tag、S-tag、SBP-tag、Softag 1-tag、Softag 3-tag、Strep-tag、TC tag、V5-tag、T7-tag、VSV-tag、Xpress-tag、Isopep-tag、Spy-tag、Snoop-tag、Trx-tag等22种抗原标签序列。纯化后的融合蛋白可与各种蛋白标签抗0体发生特异性反应。

通用步骤

加血0清封闭液

1. 去掉片子上多余缓冲液。

2. 取适量血0清封闭液完全覆盖切片。

3. 在湿盒中室温孵育 15min。

4. 浸入洗涤缓冲液中 5min。

加一抗

1. 去掉切片上的多余洗涤缓冲液。

2. 将稀释的一抗加到切片上，完全覆盖***细胞。

3. 在湿盒中室温孵育 30min。

4. 用洗涤缓冲液洗去一抗，在洗液中润洗 5min。

注：如果显色速度过快，建议进一步稀释一抗，将一抗稀释度以 1/50、1/100、1/200、1/400 和 1/800，***佳稀释度的选择是显色 10min 后阳性显色效果满意而没有背景显色。

注意事项

1. 用辣根过氧化物酶时不要使用含有叠氮钠的***。

2. 避免使用含次氯酸的去污剂。

3. 设阳性对照、阴性对照和***对照。

4. 不要使用卵清蛋白作为切片粘连剂，使用明胶或多聚赖氨酸。

5. 孵育过程中不要使片子干掉。

6. 洗涤后洗涤液尽量去净。

7. 用低熔点石蜡以减少抗原变性（> 60°C）。

8. 用新鲜配制的 4%缓冲多聚甲醛可更好保存抗原活性。

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抗0体稀释液，即用于稀释抗0体的溶液。在抗原抗0体反应的实验中，需用已经制备的抗0体检测样本中的抗原，但抗0体***的浓度很高，需要稀释合适的倍数后才可以用于检测抗原。

脱脂奶粉

脱脂奶粉容易发霉变质，不利于抗0体的回收和保存；国产milk脱脂不充分会增加背景、拮抗抗原抗0体结合，且不能用来做磷酸化蛋白；不能用于稀释二抗。