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博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗，涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗；品类齐全的内参标签抗0体；另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。

1.选择部分样品进行预实验，参考目的蛋白一抗说明书进行3个稀释度的预实验

2.向客户反馈预实验结果，等待客户确认预实验结果后确定是否进行正式实验

3.请您提供质量0保证的一抗（或委托我公司代购）。抗0体的使用量通过预实验后进行确认，一般不回收使用一抗

4.如果需要对膜上目的蛋白进行抗0体剥离（洗脱或者 stripping）的，请提前说明

实验步骤：

1、弃去板内液体，洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。再在每个标本的6孔中分别加入6种酶标二抗各100μl，通用阳性、阴性对照的各孔也一样。在加样图上或酶标板上做好标记。贴上封板膜37℃温育30分钟。

2 、吸弃板内液体，洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。每孔分别加入显色剂 A 和显色剂 B 各50μl，换一张新的封板膜贴板避光37℃显色20分钟。

3 、ELISA***盒特异性好一般肉眼即可观察出结果，看显色蓝的那个孔所对应的酶标二抗就知道此标本的 Ig 类或亚类。更可将反应终止液（每孔50μl）终止反应后用酶0标仪450nm 测长，630nm 参考波长双波长测定结果，参看高值孔所对应的酶标二抗就知道此标本的 Ig 类或亚类(阳性对照 OD 一般不小于0.8，阴性对照一般不高于0.15，阳性判定标准：样品 OD 大于阴性 OD+0.15，阴性 OD 低于0.05按0.05算)。

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单克0隆抗0体（单抗制备）制备过程有以下几个步骤：

步骤一：细胞免0疫

免0疫动物免0疫动物是用目的抗原免0疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。 一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠，按照预先制定的免0疫方案进行免0疫注0射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免0疫器0官，刺激相应B淋巴细胞克0隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。

步骤二：细胞融合

采用眼球摘除放血法处死小鼠，无菌操作取出脾0脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨0髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙 二醇。在聚乙 二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨0髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。

人们抽取动物的血液，分离出含抗0体的。这种体内生产抗0体的传统方法有许多缺点。例如所获得的抗0体不纯，不能连续生产，动物饲养与管理工作繁重等，故长期以来***家们一直在探索在试管内（即体外）生产抗0体的方法， 1976年英国剑桥大学两位科学家Milstein和Koh1er将小鼠瘤细胞与小鼠的脾细胞杂交。小鼠瘤细胞能在体外增殖传代并能分泌无抗0体活性的球蛋白；小鼠脾细胞能产生针对某种抗原的抗0体，但不能在体外增殖。将两者融合成一种杂交瘤细胞，后者继承了两个亲代细胞的特点，既可在体外增殖，又可产生针对某种抗原的抗休。一个杂交瘤细胞在体外不断增殖所形成的细胞集团，被称之为。