自备材料：

1、细胞计数器

2、细胞冻存管

3、超低温冰箱或液氮

4、超净工作台

操作步骤(仅供参考)：

1、培养细胞至对数生长晚期，显微镜观察其外观、形态、有无污染等，取状态良好的细胞进行冻存操作。如为贴壁生长细胞，用胰蛋白酶消化并用完全培养基终止消化，进行细胞计数；如为悬浮生长细胞，进行细胞计数。

2、500～1000g离心5min，弃上清。

3、加入适量的通用细胞冻存液，重悬细胞，使细胞浓度达到1～10×106/ml，置于冻存管中，密闭、不要拧的太紧，避免弯曲变形。

4、一般遵循1℃/min的速率进行冷冻。亦可采用4℃20min，-20℃30min，-70℃过夜，***后置于液氮罐中长期存储。

产品简介

无血0清细胞冻存液，通用于人和各种动物细胞株。特别配方（主要成分为DMSO和氨基酸）具有有效提高细胞冻存活率和复苏活力。不含动物来源性蛋白，能减少各类病毒、霉菌和支原体等的污染，确保冻存细胞安全。既适用于一般培养细胞的冻存，也适用于无血0清培养细胞和蛋白表达细胞的冻存。

产品特色

·不含动物源成分，病毒、霉菌和支原体等污染可能性低，各批产品之间有更高的产品质量一致性。

·成分明确，无批次差异。

·可直接存放于-80℃冰箱冻存，无需经过费时的程序降温过程（省时、省力、省钱）。

配方有效提高细胞冻存存活率及复苏率

即用型，无需现配，即开即用

通用型，适用于冻存各种细胞系，原代细胞

可微量，原位冻存，例如杂交瘤细胞的冻存，省时高0效

存储条件

储存于4℃以下,质量保障期从产品的生产日期起，为期两年。3个月以上没有使用冻存液计划时，尽可能-20℃冷冻保存。为避免重复冻融过程可能导致的冻存液品质下降和性能降低，推荐将产品分装成小管后，再存放于4℃以下或-20℃冰箱冻存。

冻存细胞复苏步骤：

1、 从冰箱中取出冻存的细胞，立即置于37℃水浴槽中快速解冻。

2、 待冻存管中的细胞混合液完全融化后，立即加入1ml细胞培养基于冻存管中与细胞混合，将其中的混合液移至含有约5ml该细胞培养基的离心管中，1000rmp离心5分钟，收集冻存细胞沉淀，移去上清液（注意勿将细胞沉淀倒掉）。

3、 加入适量的新鲜培养基，使用移液管缓缓加入细胞沉淀中，轻柔混匀，将混匀好的细胞移至事先准备好的培养容器中。

4、 镜检观察，待细胞状态***后可进行其他研究或者培养处理。

细胞冻存案例：

A431（人0皮肤基底细胞***）、LOVO（人结肠0***细胞）、Jecket、 MH-s（肺泡巨噬细胞）、THP1 人单核细胞型淋巴0瘤、PBMC 、HTR-8、tccsup、293T、293FT、HCT-8、RPTEC、L-WRN、MRC-5、huh7、lm6、MCF-7、MDA-MB-231、MV4-11、MOLM-13、U937、HL60、TG-1、BaF3、32D、牙齿干细0胞、英文名是stem cells from apical papilla 、h460、bxpc3、panc1、patu8988、cfpac1。aspc1（人转移胰0腺0***细胞） 人的外周血细胞、单核细胞、淋巴细胞、中性粒细胞、monocyte（单核细胞）、Neutrofile、MEF、B16、Hela、HepG2（人肝0***细胞）、RKO（人低分化的结肠0***细胞）、HCT116（人结肠0***肿0瘤细胞）、N2A（Neuro-2a小鼠来源***瘤母细胞）、脂肪细胞、3T3-L1（小鼠胚胎成纤维细胞）