【摘要】 目的建立一种快速制备甲胎蛋白单克0隆抗0体(AFP—McAb)杂交瘤细胞系的方法。 方法 以常规和改良两

种方式同时免0疫8～12周Balb／c小鼠，取小鼠脾细胞与骨0髓瘤细胞SP2／0融合并行次黄piao呤、氨基蝶呤与胸苷选择性培养。

用间接酶链免0疫吸附试验法(EI。ISA)筛选阳性克0隆株，并建立细胞系。 结果 在较短时间内，改良法能获得高0效价的免0疫

抗0体，与常规免0疫法相比有极显著差异(P<0．001)，同时改良法的细胞融合率和抗0体阳性率也显著高于常规免0疫法

(P<o．001)。筛选获得的高0效分泌抗人AFP—McAb的阳性杂交瘤细胞珠进行了初步鉴定。 结论 新的改良方法优化了

常规的McAb制备中动物免0疫程序，并能成功筛选出AFP—McAb杂交瘤细胞系。

结 果

一、两种免0疫方式小鼠血0清效价比较

对两组试验动物在完成了基础免0疫后，尾静脉采集少量血液，分离血0清，进行间接ELISA测定抗0体效价，检测结果见图1。由图中数据可知，新的改良免0疫方法，在第二次免0疫后，抗0体效价即达到1：104。两组数据经生物学统计软件SPSS(Windows 13．0版)进行t检验，统计结果差异极显著(P(0．001)。

二、两种免0疫方式小鼠融合率比较

在细胞融合后约7～10 d可见孔内杂交瘤细胞生长，当细胞融合成片达孔底面积的35％～50％时，用ELISA检测特异性抗0体。两组免0疫小鼠细胞著。改良法耗费时间短，但获得的抗0体效价更高。

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杂交瘤细胞的筛选与克0隆

细胞融合后，培养于添加了 HAT 的选择培养基的 96 孔板中，培养一天后半定量换液，培养基更换时应注意轻缓，第 5 天能在显微镜下看到明显的杂交瘤细胞克0隆，第 7 天左右，杂交瘤细胞能长至铺满孔底约 1 /10。此时进行 ELISA 检测养心细胞孔。取细胞培养上清对 MRJ 融合蛋白进行间接 Elisa检测，筛选出能分泌抗0体的杂交瘤细胞孔，有限稀释法对阳性孔进行亚克0隆，经过 3 次亚克0隆后，获得了能够稳定 分 泌 抗 MRJ 融合蛋白单克0隆抗0体的细胞株。对杂交瘤细胞株按从 96 孔板-24 孔板-10 cm 培养皿的顺序扩大培养，部分细胞用于腹0水制备单抗，部分细胞冻存备用。