碳二类化合物可用于氨基和羧基的缩合。在该类化合物中N,Nˊ-二环己基碳二(DCC)相对便宜,而且可溶于肽合成常用的溶剂。在肽键形成期间,碳二转变为相应的脲衍生物,N,Nˊ-二环己基脲可以从反应液中沉淀出来。显然,碳二活化后的活性中间体氨解和水解速率不同,使肽合成能在含水介质进行。经几个课题组的大量研究,确立了以碳二为缩合剂的肽缩合反应机理,羧酸根离子加成到质子化的碳二,形成高活性的O-酰基脲;虽然还没有分离出这个中间体,但通过非常类似的稳定化合物推断了它的存在。O-酰基脲与氨基组分反应,产生被保护的肽和脲衍生物。或者,与质子化形式处于处于平衡状态的O-酰基异脲,被第二个羧酸酯亲核进攻,产生对称的氨基酸酐和N,Nˊ-二取代脲。
多肽是复杂的大分子,因而每条序列在物理和化学特性上都是共同的,有些多肽合成很艰难 ,另有些多肽虽然合成相对简单,但纯化艰难;常见的疑问是很多肽不溶于水溶液,因而在纯化中,这些疏水肽有必要溶于非水溶剂中或特别的缓冲液,而这些溶剂或缓冲液很也许不适合应用于生物试验体系,因而研究人员不能运用该多肽到达自个的意图。
Boc方法是经典的多肽固相合成法,以Boc作为氨基酸α-氨基的保护基,类作为侧链保护基,Boc的脱除通常采用三氟(TFA)进行。多肽合成时将已用Boc保护好的N-α-氨基酸共价交联到树脂上,TFA切除Boc保护基,N端用弱碱中和。
肽链的延长通过二环己基碳二(DCC)活化、偶联进行,终采用强酸(HF)法或三氟甲磺酸(TFMSA)将合成的目标多肽从树脂上解离。在Boc多肽合成法中,为了便于下一步的多肽合成,反复用酸进行脱保护,一些副反应被带入实验中,例如多肽容易从树脂上切除下来,氨基酸侧链在酸性条件不稳定等。