在整个实验过程中，目视检查吸头和孔的吸出物、添加和取出的***应与方案数值一致，不应该因为操作不当出现偏差。

—Don’t be tempted to mix lots between kits to get more out of your reagent. ELISA kits are each prepared so that the contents work together. Mixing lots between assays could adversely affect performance.

不要试图将不同种类的***盒混用以获得更多***。每种功能ELISA***盒都要准备好，在测定之间批次混合使用可能会对结果产生不利影响。

—Once a reagent has left the bottle, it should not be returned.

吸取***时，一旦***离瓶，不应该再放回原***瓶，防止交叉污染。

—Don’t allow the wells to dry out once testing has begun, keep the tray sealed to prevent drying.

一旦测试开始，不要让孔干燥，保持板子密封以防止干燥。

elisa实验中，恰当的洗涤步骤对于减少由于未结合的偶联***引起的背景信号是必要的，所以正确的洗涤步骤有助于增加分析的信噪比和保证单一特异性结合。

确保洗涤液体积足够多，以除去孔中游离的抗原或***的痕迹，从而减少不需要的背景信号。

保持孔底和洗涤端之间的建议距离，以减少残留的***/抗原液体，从而影响信号。浮动头更灵活，更容易获得完整的清洗。重复循环洗涤以确保除去不需要的抗原和***，但已结合的***会保留在结合原位。

Biorbyt建议在每次孵育后进行三次洗涤。根据您所使用的板子是出厂包被还是您自己包被的，可以对洗涤方式进行调整，如果是您自己包被的板子，您可能需要增加清洗次数。

保证整个ELISA试验过程的准确性将提高您对数据的信心。您的目标是以高精que度生成多条标准曲线。您需要至少以一个样本两次重复（是三个重复）测试您的样本。您需要每个重复之间维持*小的可变系数（％CV），保证重复结果的稳定性。如果数值明显异常，就需要分析可能导致结果异常的潜在原因。异常数值产生的一个可能原因是由于96孔板生产原因或由于外部孔引起的“边缘效应”。会影响实验CV值的因素还包括：样品不正确的储存或制备方式，孔中有气泡，洗板不完全，***混合不当，不恰当的温度控制以及移液操作技术。光密度（OD）高于或低于标准曲线线性范围的样品将分别导致目标浓度被低估或被高估。

按照***盒制造商的建议，对***盒***进行恰当的保存，处理和移液操作至关重要。根据说明书和实验方案的推荐进行稀释剂，***和清洁剂的选择，并保持***盒使用的正确pH，温度和强度条件，检查小瓶/管***在（离心）旋转后充分溶解。每种测定方法不一定完全相同，但应该有可以接受的变化范围。应为每组样品制备标准曲线。在厂家建议的稀释范围内生成标准曲线，并确保您有足够的数据点。试图扩大延长标准曲线没有任何好处，因为***结合只能在一定范围内产生数据。