由于TKgst D结构未知,所以以TKban的X射线晶体结构为模板构建了包含其磷酸化受体醛糖 d-erythrose--phosphate (EP)的TKgst活性位点袋模型,该模型与相同微生物物种的具有高同一性。为提高TKgst对(S)-,-二羟基酮-的裂解活性,分别针对残基Leu、Leu、Phe和Asp进行了研究。对这些位置的S***表明,DI、LF、FI和LI是为底物结合提供疏水环境的突变体(表)。为了确定提高TKgst活性以裂解脂肪族-或 -羟基酮或的合理位置,基于先前发现的位置来增加TKgst活性以形成相同的以酸类似物作为供体,脂肪醛作为受体的脂肪族α-羟基酮。
单个TKgst突变体DI、LF、FI和LI 在大肠 BL菌株中表达并进行纯化。将TKgst突变体与型TKgst对(S)-羟基酮-的活性进行了比较(Chart )。(S)-,,-trihydroxybutan--one (l-erythrulose,) 是型TK的非磷酸化底物之一,被选为对照。型和突变体对表现出的活性,除了DI,它是被脂肪链取代的极性残基。非极性残基Ile代替Asp显着降低酶的活性,可能是由于缺乏与的C的羟基的相互作用。脂肪链对其他非极性残基的突变对活性没有影响。
版权所有©2024 产品网