用脂肪族α-羟基酮-筛选TKgst突变体库为了确定TKgst突变体(酶裂解物或纯化酶)对脂肪族α-羟基酮-裂解的比活性,通过分光光度法在 nm 处通过消耗还原形式的烟酰胺腺呤二核苷酸 (NADH) 并使用酵母乙醇脱氢酶 (ADH) 作为辅助酶来检测醛 "–" 的释放。该方法通过移动TKgst平衡来连续测量TK的初始速度。TK作为转移酶,整个过程需要醛作为受体底物,受体的缺失会大大降低 TKgst活性。磷酸化醛糖、d-核糖--磷酸 (d-RP)、戊糖磷酸途径中的TK受体或 d-赤藓糖是 TK的非磷酸化受体之一(方案)。
与(该突变体的底物)反应的原位 H NMR 研究表明, 小时后乙醇醛转化率为,并以产率形成产物,证明的C-C键被FI裂解(表)。选择HLH(S、G或A)LI三重突变体来切割,在小时后乙醇醛全部或几乎全部转化。HLHSLI性能,产物的产率为,而HLHALI为,HLHGLI为。这是因为乙醇醛自缩合形成 l-赤藓酮糖。 此外,结果显示,HLHSLI比HLH(G或A)LI的效率略高,这与这些突变体的热稳定性研究一致。
研究认为,活性H来源于B-H键的解离,SSBC加速了H的提取。这与计时安培试验的结果一致[图(b)]。图?(a)反应速率常数Kapp与石墨N含量的关系;(b)反应速率常数Kapp与IDIG值的关系。图(a)显示出反应速率常数Kapp与石墨氮含量的关系,可以观察到石墨氮和Kapp含量之间的近正线性关系。还发现-还原的催化活性与石墨氮的含量之间存在较高的相关性。证明石墨氮在硝基芳烯中表现出的吸附能和长的N-O键,这可能是其比掺杂石墨烯中其他氮活性更高的原因。