用脂肪族α-羟基酮-筛选TKgst突变体库为了确定TKgst突变体(酶裂解物或纯化酶)对脂肪族α-羟基酮-裂解的比活性,通过分光光度法在 nm 处通过消耗还原形式的烟酰胺腺呤二核苷酸 (NADH) 并使用酵母乙醇脱氢酶 (ADH) 作为辅助酶来检测醛 "–" 的释放。该方法通过移动TKgst平衡来连续测量TK的初始速度。TK作为转移酶,整个过程需要醛作为受体底物,受体的缺失会大大降低 TKgst活性。磷酸化醛糖、d-核糖--磷酸 (d-RP)、戊糖磷酸途径中的TK受体或 d-赤藓糖是 TK的非磷酸化受体之一(方案)。
与HLH(G或A)L相比,这些突变体随着时间的推移(在°C下)具有更高的热稳定性。HLHSLI活性位点的分子模型表明,Ser在位的存在有利于与Asp 的相互作用,这对于稳定链A或B的Asp 和链B或A的Arg 之间的桥似乎很重要。产物的对映体过量(ee ) 表明存在一种主要的对映体,表明TKgst突变体对C有高度的立体选择性控制。
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