随后基于这些结果，研究了TK反应的可逆性（模拟逆偶环缩合），用于用适当的 TKgst 变体裂解脂肪族 α-羟基酮（方案 B）。构建TKgst突变体库在戊糖磷酸途径中，磷酸化醛糖 (C-C)和酮糖 (C-C) 分别是TK的受体和供体底物。为了提高TKgst对非磷酸化α-羟基酮- 的活性（表），根据通过位点饱和诱变 (S***) 进行的半合理诱变在目标位置修改了TKgst活性位点。TKsce、TKec和来自的TK (TKban) 等微生物TK的D结构具有很强的蛋白质序列同源性。稳定TK 底物的关键残基是相同的，并且与ThDP具有相似的方向。

通过亲和色谱纯化所有候选物，并使用前面描述的分光光度测定法确定它们对的比活性（Chart ）。虽然型TKgst对没有表现出活性，但与HLHS 相比，包含LI的所有突变体都具有更高的活性，表明该突变对的C-C键切割提供了协同效应。结果（Chart ）表明，用非极性残基如Gly (HLHGLI)代替His 显着提高了活性。Gly和其他两个脂肪族残基提供的疏水环境有利于稳定的非极性头部（）（图）。

在剧烈的条件下，产物a也未能产生二醇（eq. ）；并且在另一种对映体配体的条件下，也未发生该转化（eq. ）。两种催化剂对映体的手性袋与羟基酮似乎并不相容。当用NaBH还原a时，仅定量得到手性反式二醇；而将保护羟基后，在相同条件下用NaBH还原该酮仅得到顺式二醇（eq. ）。其合理的解释可能是形成硼酸酯后进行分子内氢迁移，这可能是硼酸酯发生酯交换的结果。 ?（图片来源：Chem. Sci.）