然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根过氧化物酶）酶结合物，经第二次孵育后，酶结合物就会与次孵育结合上的HEV IgM相结合，洗板除去未结合的酶结合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育时会发生酶-底物反应，只有那些含有HEV IgM和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化，加入***溶液终止酶和底物间的反应
做好对照正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊、兔或BSA等封闭。实验条件的选择在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:（1） 固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚、聚、聚丙酰胺和纤维素等。
检测及酶结合物的稀释度合适(均为1:30), 方便试验操作者准确地做稀释工作，保证实验结果的重复性。白介素6是一种,已被证实为B细胞分化因子.它是一种形成系统,它的生理特性,如肝细胞急性蛋白合成的诱导和基于和白介素3协同作用的生激等,也备受关注.并且已证实白介素-6与病理学存在稳定的相关关系.例如,报道多种***的生长因子为白介素-6, 瘤细胞能合成白介素-6并表达白介素-6受体。
