组成编辑完整的ELISA***盒包含以下各组分:(1)已包被抗原或的固相载体(吸附剂);(2)酶标记的抗原或(结合物);(3)酶的底物;(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制(定量测定中);(5)结合物及标本的稀释液;(6)洗涤液,在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水;(7)酶反应终止液,常用的HRP反应终止液为***,其浓度按加量及比色液的终体积而异,在板式ELISA中一般采用3mol/L。
ELISA检测***盒应用定性夹心检测技术,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是中国型HEV毒株氨基酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM,这些就会与HEV 的多肽抗原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特异性和样品中的其它成份。
器材(1) 聚塑料板(简称酶标板)40孔或96孔,ELISA检测仪,50μl及100μl加样器,塑料滴头,小毛巾,洗涤瓶。(2) 小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。(3) 4℃冰箱,37℃孵育箱。试验原理***盒是固相夹心法酶联吸附实验(ELISA).已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。